Иммунофенотипирование гемобластозов

Значний прогрес в гематологічних дослідженнях пов'язаний в останні роки з використанням сучасних імунологічних методів і автоматизованих засобів аналізу і сортування клітин периферичної крові і кісткового мозку - проточних цитометров. Традиційні морфологічні та цитохімічні дослідження клітин субстрату хвороби (кров, червоний кістковий мозок, лімфатичні вузли, селезінка тощо) у багатьох випадках, особливо при лімфопроліферативних захворюваннях, не дозволяють виявити все різноманіття варіантів серед морфологічно подібних форм і встановити джерело походження патологічного клону . Ці завдання можуть бути вирішені тільки шляхом вивчення імунологічної характеристики клітин. Кожній стадії диференціювання гемопоетичних клітин відповідає свій набір антигенів, які за міжнародною класифікацією називаються дифференцировочного і поділяються на кластери диференціювання, що позначаються CD.

При неопластичних зміни блок диференціювання може статися на будь-якій стадії нормального розвитку клітин, в результаті чого утворюється клон патологічних клітин, що визначають субстрат хвороби і мають однакову імунологічну (або фенотипічну) характеристику. Провівши дослідження цих маркерів на клітинах, можна визначити, якій формі і варіанту захворювання вони відповідають, тобто на основі імунологічного фенотипу клітин проводити диференційну діагностику, яка найбільш важка при лімфопроліферативних захворюваннях, тому що основний клітиною патологічного субстрату хвороби є морфологічно майже однотипні клітини.

Фенотипування дозволяє за допомогою моноклональних антитіл типировать бластні і зрілі клітини крові миело-, моно-, лімфоцитарного ряду за наявністю дифференцировочного антигенів (рецепторів) в клітинній стінці. У розділі «Оцінка імунного статусу організму» частково викладена характеристика і діагностичне значення дослідження клітинних маркерів; нижче наведена коротка характеристика антигенних маркерів клітин стосовно до діагностики гемобластозів. На мембранах клітин крові і червоного кісткового мозку можна виявити такі антигени (маркери).

• CD2 - одновимірний трансмембранний гликопротеид. Він присутній на поверхні всіх циркулюючих в крові Т-лімфоцитів і на деяких NK-лімфоцитах. CD2 бере участь в процесі альтернативної активації Т-лімфоцитів. Виявлення CD2 за допомогою моноклональних антитіл в клінічній практиці використовують для фенотипування гострих Т-клітинних лейкозів, лімфом, хронічних запальних і імунодефіцитних станів.
• CD3 - білковий комплекс, асоційований з антиген-специфічним Т-клітинним рецептором, це основний функціональний маркер Т-лімфоцитів. Він сприяє передачі сигналу активації з мембрани в цитоплазму клітини. Визначення CD3 показано для діагностики гострих Т-клітинних лейкозів, лімфом (CD3 НЕ експресується прі не-Т-клітинних лімфоїдних новоутвореннях) і імунодефіцитних захворювань.
• CD4 - трансмембранний гликопротеид, експрессіруемий субпопуляцією Т-хелперів (індукторів), що складають 45% лімфоцитів периферичної крові. На ранніх стадіях розвитку лімфоцитів в тимусі, антигени CD4, так само як CD8, експресується всіма кортикальними лімфоцитами. Мозкові тімоціти, фенотип яких схожий зі зрілими CD4 + Т-клітинами периферичної крові (Т-хелпери), експресують вже або CD4, або CD8 рецептори. У периферичної крові до 5% клітин несуть одночасно маркери CD4 і CD8. Незначна експресія CD4 можлива на деяких клітинах моноцитарного ряду. CD4 експресується в більшості випадків Т-клітинних лімфом, включаючи грибоподібний мікоз, а також при HTLV-асоційоване Т-клітинному лейкозі (HTLV - human T-lymphotropic virus - Т-лімфотропний вірус людини).
• CD5 - одноланцюговий гликопротеид, присутній на всіх зрілих Т-лімфоцитах і більшості тимоцитов, слабо експресується В-лімфоцитами. CD5 виявляють на неопластических клітинах В-клітинного хронічного лімфоцитарного лейкозу і центроцітарной лімфоми. При інших типах злоякісних лімфоїдних захворювань - фолікулярної лімфоми, волосатоклеточном лейкозі, крупноклеточной лімфомі - CD5 НЕ експресується.
• CD7 - одноланцюговий білок, найраніший маркер Т-клітинного диференціювання. Він експресується про-Т-лімфоцитами ще до міграції їх в тимус. CD7 виявляють на більшості NK-клітин, слабка експресія відзначена на моноцитах. В-лімфоцити і гранулоцити не містять цього антигену. Визначення CD7 застосовують з метою діагностики лімфом, дитячих Т-клітинних лімфобластних лейкозів.
• CD8 - білок, що складається з двох поліпептидних ланцюгів, пов'язаних дисульфідними містками. Він експресується субпопуляцією цитотоксичних і супресорних Т-лімфоцитів, які становлять 20-35% лімфоцитів периферичної крові. Цей антиген мають також NK-лімфоцити, кортикальні тімоціти, 30% мозкових тимоцитов і субпопуляції клітин червоного кісткового мозку. CD8 досліджують для кількісної оцінки змісту Т-супресорів (див. Вище розділ «Т-лімфоцити-супресори в крові»).

• CD10 - асоційована з клітинною мембраною ендопептідаза. CD10 експресують молоді форми В-лімфоцитів і субпопуляція кортикальних лімфоцитів. CD10 експресують все клітини ОЛЛ.
• CD11с експресують на клітинній мембрані макрофаги, моноцити, гранулоцити, NK-клітини і клітини волосатоклітинному лейкозу.
• CD13 - гликопротеид, експрессіруемий клітинами мієломоноцитарний ряду (клітини-попередники, нейтрофіли, базофіли, еозинофіли, моноцити і клітини мієлоїдних лейкозів). Він відсутній на Т і В-лімфоцитах, еритроцитах і тромбоцитах.
• CD14 - поверхневий мембранний гликопротеид. Його експресують в основному моноцити і макрофаги. CD14 визначають більш ніж на 95% моноцитах периферичної крові і кісткового мозку. Сильну експресію CD14 спостерігають при гострих мієлобластних лейкозах. При гострих і хронічних лімфобластних лейкозах цей антиген НЕ експресується.
• CD15 являє собою олігосахарид. Він бере участь в процесах фагоцитозу і хемотаксису. Цей антиген присутній на поверхні зрілих гранулоцитів і клітинах Березовського-Штернберга. Експресію антигену CD15 виявляють при хворобі Ходжкіна. При неходжкінських лімфомах CD15 в більшості випадків не виявляють.
• CD16 експресується на поверхні гранулоцитів, моноцитів, макрофагів і NK-клітин. Всі лімфоцити, які експресують цей антиген, мають здатність до антителозависимой клітинної цитотоксичності. CD16 визначають при типування хронічних мієлоцитарного лейкозів, для характеристики NK-клітин.
• CD19 - глікопротеїн, присутній на всіх периферичних В-лімфоцитах, а також на всіх попередників В-клітин. Він відсутній на плазматичних клітинах. Це найбільш ранній маркер В-клітин, грає важливу роль в регуляції активації і проліферації В-лімфоцитів. CD19 експресується на всіх неопластичних клітинах гострих лейкозів В-клітинного походження, а також присутній при деяких формах гострих монобластний лейкозів.
• CD20 - неглікозильовані білок. В онтогенезі В-лімфоцитів антиген CD20 з'являється після CD19 на стадії пре-В-клітинної диференціювання лімфоцитів. На плазматичній мембрані плазматичних клітин він відсутній. Експресується при ГЛЛ, В-клітинних хронічних лимфоцитарних лейкозі, волосатоклітинному лейкозі, лімфомах Беркітта і дуже рідко - при гострих монобластний лейкозах.
• CD21 - гликопротеид, в значній кількості присутній на В-лімфоцитах в лімфоїдних органах і в невеликій кількості - на В-клітинах периферичної крові. CD21 - рецептор для вірусу Епстайна-Барр.
• CD22 - білок, що складається з двох поліпептидних ланцюгів. Експресується на мембрані більшості В-лімфоцитів, включаючи клітини-попередники (пролімфоціти). Антиген НЕ експресується на В-лімфоцитах (плазматичніклітини) після їх активації. Найбільш виражену експресію CD22 виявляють на клітинах при волосатоклеточном лейкозі, слабку - при мієлоїдних лейкозах і не-Т-клітинних ГЛЛ.
• CD23 - гликопротеид, експрессіруемий активованими В-лімфоцитами периферичної крові в набагато більшому ступені. CD23 опосередковує IgE-залежну цитотоксичність і фагоцитоз макрофагами і еозинофілами.
• CD25 - одноланцюговий гликопротеид, ідентифікований як нізкоаффінние рецептор до ІЛ-2. Цей рецептор експресується на активованих Т-лімфоцитах і, з меншою щільністю, на активованих В-клітинах. У периферичної крові здорових людей антиген присутній більш ніж на 5% лімфоїдних клітин.
• CD29 - рецептор фібронектину. Широко поширений в тканинах, експресується лейкоцитами. Визначення CD29 на клітинах периферичної крові використовують для типування субпопуляції Т-клітин, що мають фенотип CD4 + CD29 +, які називають хелперами 2 типу (Th2). Ці клітини за допомогою продукції лімфокінів беруть участь в реалізації гуморального імунної відповіді.
• CD33 - трансмембранний гликопротеид. Присутній на поверхні клітин мієлоїдного і моноцитарного рядів. Його виявляють на поверхні моноцитів і, в меншій мірі, гранулоцитів периферичної крові. Приблизно 30% клітин червоного кісткового мозку експресують CD33, включаючи мієлобласти, проміелоціти і міелоціти. Антиген відсутній на мембранах поліпотентних стовбурових клітин. Визначення CD33 використовують для характеристики клітин при лейкозі миелоидного походження. Клітини лейкозів лімфоїдного і еритроїдного походження не експресують CD33.
• CD34 - фосфоглікопротеін, експресується гемопоетичними клітинами-попередниками, включаючи монопотентние стовбурові клітини. Найбільш виражену експресію Аг спостерігають у ранніх попередників; при дозріванні клітин експресія маркера падає. CD34 виявлений також на ендотеліальних клітинах. Визначення CD34 використовують для характеристики клітин при гострих миело- і лімфобластних лейкозах. При хронічних лимфоцитарних лейкозах і лімфомах експресії антигену CD34 не виявляється.

• CD41а експресується тромбоцитами і мегакариоцитами. Моноклональні антитіла для виявлення CD41а використовують для діагностики мегакаріобластного лейкозу. При тромбастенії Глянцманна експресія цього антигену відсутня або значно пригнічена.
• CD42b - мембранний гликопротеид, що складається з двох поліпептидних ланцюгів. Маркер виявляють на поверхні тромбоцитів і мегакаріоцитів. У клінічній практиці виявлення CD42b використовують для діагностики тромбоцитопатії - синдрому Бернара-Сульє.
• CD45RA належить до класу трансмембранних глікопротеїнів. Це загальний лейкоцитарний антиген. Експресується на клітинній мембрані В-лімфоцитів, в меншій мірі Т-лімфоцитів і на зрілих мозкових тимоцитах. Маркер НЕ експресується гранулоцитами.
• CD45RО - низькомолекулярна изоформа CD45RA - загального лейкоцитарного Аг. Виявляють на Т-клітинах (Т-лімфоцити пам'яті), субпопуляції В-лімфоцитів, моноцитах і макрофагах. Моноклональні АТ до CD45RО взаємодіють з більшістю тимоцитов, субпопуляцією покояться CD4 + і CD8 + Т-лімфоцитів і зрілими активованими Т-клітинами. Клітини мієломоноцитарний походження, гранулоцити і моноцити також несуть цей антиген. Його виявляють при центробластних і імунобластні лімфомах.
• CD46 - О-глікозильований димер. Він широко поширений в тканинах і експресується Т-і В-лімфоцитами, моноцитами, гранулоцитами NK-клітинами, тромбоцитами, ендотеліальними клітинами, фібробластами, але відсутній на поверхні еритроцитів. CD46 забезпечує захист тканин від дії комплементу.
• CD61 - тромбоцитарний антиген. Експресується на тромбоцитах периферичної крові і червоного кісткового мозку, а також на мегакаріоцитів і мегакаріобласти. Його визначення використовують в якості маркера при гострих мегакаріобластний лейкозах. Експресія антигену відсутня або пригнічена у хворих з тромбастенію Глянцманна.
• CD95, званий також Fas або APO-1, - трансмембранний глікопротеїн, член сімейства рецепторів фактора некрозу пухлин. Він експресується в значних кількостях на Т-лімфоцитах (CD4 + і CD8 +) периферичної крові і, в меншій мірі, на В-лімфоцитах і NК-клітинах. Цей антиген експресується також на гранулоцитах, моноцитах, клітинах тканин і неопластичних клітинах. Зв'язування CD95 з Fas-лігандом (CD95L), індукує в клітинах апоптоз.
• CD95L, або Fas-ліганд, мембранний білок, що відноситься до сімейства рецепторів фактора некрозу пухлин. Цей антиген експресується цитотоксическими Т-лімфоцитами, NК-клітинами і дуже часто пухлинними клітинами; основний індуктор апоптозу в клітинах.
• HLA-DR - мономорфная детермінанта молекул II класу головного комплексу гістосумісності людини (HLA). Маркер експресується на клітинах Лангерганса, дендритних клітинах лімфоїдних органів, визначених типах макрофагів, В-лімфоцитах, активованих Т-клітинах і епітеліальних клітинах тимуса. Дослідження на даний маркер використовують для кількісного визначення активованих Т-лімфоцитів з фенотипом CD3 + HLA-DR +.

Використовуючи різний підбір моноклональних антитіл до маркерів, можна скласти фенотипический портрет клітин, характерних для даної форми лейкозу.

Крім використання методів іммунофенотіпірованія для діагностики та диференціальної діагностики гемобластозів, особливо важливим виявилося їх застосування в процесі лікування для оцінки стану ремісії і залишкової популяції лейкозних клітин. Знаючи фенотипический «портрет» бластних клітин в період встановлення діагнозу, за цими маркерами вдається виявити клітини лейкозного клону в період ремісії, а по наростанню їх кількості - передбачити розвиток рецидиву задовго (за 1-4 міс) до появи його клініко-морфологічних ознак.

[1], [2], [3], [4],