Холерний вібріон

За визначенням ВООЗ, холера - це інфекційна хвороба, для якої типовий гострий важкий зневоднюється пронос з випорожненнями у вигляді рисового відвару, який є наслідком зараження Vibrio cholerae. У зв'язку з тим, що для неї характерні різко виражена здатність до широкого епідемічного розповсюдження, важкий перебіг і висока летальність, холера належить до особливо небезпечних інфекцій.

Історичною батьківщиною холери є Індія, точніше, дельта річок Ганг і Брахмапутра (нині Східна Індія і Бангладеш), де вона існує з незапам'ятних часів (епідемії холери в цьому районі спостерігали ще за 500 років до н. Е.). Тривале існування тут ендемічного вогнища холери пояснюється багатьма причинами. Холерний вібріон може не тільки довго зберігатися у воді, але і розмножуватися в ній при сприятливих умовах - температурі вище 12 ° С, наявності органічних речовин. Всі ці умови в Індії в наявності: тропічний клімат (середньорічна температура від 25 до 29 ° С), велика кількість опадів і заболоченість, висока щільність населення, особливо в дельті річки Ганг, велика кількість органічних речовин у воді, безперервне цілорічне забруднення води стічними водами і випорожненнями , низький матеріальний рівень життя і своєрідні релігійно-культові обряди населення.

В історії холерних епідемій можна виділити чотири періоди.

I період - до 1817 року, коли холера була зосереджена тільки в Східній і Південній Азії, головним чином в Індії, і не виходила за її межі.

II період - з 1817 по 1926 р Зі встановленням широких економічних та інших зв'язків Індії з європейськими та іншими країнами холера вийшла за межі Індії і, поширюючись по шляхах економічних і релігійних зв'язків, викликала 6 пандемій, які забрали мільйони людських життів. Росія була першою з європейських країн, куди проникла холера. За період з 1823 по 1926 р Росія пережила 57 холерних років. За цей час перехворіло холерою понад 5,6 млн осіб і померло від неї 2,14 млн осіб ( «40%).

III період - з 1926 по 1961 р Холера повернулася в свій основний ендемічний осередок, і настав період відносного благополуччя. Здавалося, що з розвитком сучасних систем очищення питної води, виведення і знезараження стічних вод і розробки спеціальних протихолерних заходів, включаючи створення карантинної служби, країни світу будуть надійно захищені від чергового навали холери.

IV період почався в 1961 р і триває досі. Сьома пандемія почалася не в Індії, а в Індонезії, швидко охопила Філіппіни, Китай, країни Індокитаю, а потім інші країни Азії, Африки та Європи. Особливості цієї пандемії включаються в тому, що вона, по-перше, викликана особливим варіантом холерного вібріона - V. Cholerae eltor, який до 1961 р офіційно навіть не визнавали збудником холери; по-друге, за тривалістю вона перевершила всі попередні пандемії; по-третє, вона протікала у вигляді двох хвиль, перша з яких тривала до 1990 року, а друга почалася в 1991 р і охопила багато країн Південної та Північної Америки, включаючи США, які не знали холерних епідемій з 1866 р З 1961 по 1996 р холерою в 146 країнах перехворіло 3 943 239 осіб.

Збудник холери Vibrio cholerae був відкритий в 1883 р під час п'ятої пандемії Р. Кохом, проте вперше вібріон в випорожненнях хворих на діарею був виявлений ще в 1854 р Ф. Пацини.

V. Cholerae відноситься до сімейства Vibrionaceae, яке включає в себе кілька родів (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium). Рід Vibrio з 1985 р налічує понад 25 видів, у тому числі найбільше значення для людини мають V. Cholerae, V. Parahaemolyticus, V. Alginolyticus, V. Vulnificus і V. Fluvialis.

[1], [2], [3], [4], [5], [6],

Ключові ознаки роду Vibrio

Короткі, не утворюють спор і капсул, вигнуті або прямі грамнегативні палички, діаметром 0,5 мкм, довжиною 1,5-3,0 мкм), рухливі (V. Cholerae - монотріх, у деяких видів два і більше число полярно розташованих джгутиків) ; добре і швидко ростуть на звичайних середовищах, хемоорганотрофи, ферментують вуглеводи з утворенням кислоти без газу (глюкозу ферментують по шляху Ембдена-Мейергофа). Оксидазопозитивних, утворюють індол, відновлюють нітрати в нітрити (V. Cholerae дає позитивну нітрозоіндоловую реакцію), розщеплюють желатин, часто дають позитивну реакцію Фогеса-Проскауера (т. Е. Утворюють ацетілметілкарбінол), уреази не мають, не утворюють H2S, мають декарбоксилази лізину і орнитина, але не мають аргініндігідролази. Характерною ознакою роду Vibrio є чутливість більшості штамів бактерій до препарату 0/129 (2,4-діаміно-6,7-діазопропілптерідін), в той час як представники сімейств Pseudomonadaceae і Enterobacteriaceae до цього препарату стійкі. Вібріони - аероби і факультативні анаероби, температурний оптимум для росту 18-37 С, рН 8,6-9,0 (ростуть в діапазоні рН 6,0-9,6), деякі види (галофили) не ростуть під час відсутності NaCl. Зміст Г + Ц в ДНК становить 40-50 мовляв% (для V. Cholerae близько 47 мол%). Для диференціації всередині сімейства Vibrionaceae від морфологічно подібних пологів Aeromonas і Plesiomonas, а також для відмінності від сімейства Enterobacteriaceae використовуються біохімічні тести.

Від сімейства Pseudomonadaceae холерний вібріон відрізняється тим, що ферментує глюкозу тільки по шляху Ембдена-Мейергофа (без участі О2), в той час як перші споживають глюкозу тільки в присутності О2. Ця різниця між ними легко виявляється на середовищі Хью-Лейфсона. Середовище містить живильний агар, глюкозу і індикатор. Посів роблять у два стовпчики з середовищем Хью-Лейфсона, один з них заливають вазеліном (для створення анаеробних умов). У разі зростання холерного вібріона колір середовища змінюється в обох пробірках, в разі зростання псевдомонад - тільки в пробірці без вазеліну (аеробні умови зростання).

Холерний вібріон дуже невибагливий до живильних середовищ. Він добре і швидко розмножується на 1% -ної лужної (рН 8,6-9,0) пептонній воді (ПВ), що містить 0,5-1,0% NaCl, обганяючи зростання інших бактерій. Для придушення зростання протея до 1% -ної ПВ рекомендується додавати телурит калію (в кінцевому розведенні 1: 100 000). 1% -ва ПВ є найкращим середовищем збагачення для холерного вібріона. При зростанні він утворює через 6-8 год на поверхні ПВ ніжну пухку сіруватого кольору плівку, яка при струшуванні легко руйнується і падає на дно у вигляді пластівців, ПВ помірно мутніє. Для виділення холерного вібріона запропоновані різні виборчі середовища: лужний агар, жовчно-сольовий агар, лужної альбуминат, лужний агар з кров'ю, лактозо-сахарозний і інші середовища. Найкращою є середовище TCBS (тіосульфатцітрат-бромтимоловий сахарозний агар) і її модифікації. Однак найчастіше використовують лужний МПА, на якому холерний вібріон утворює гладкі стекловидно-прозорі з блакитним відтінком дисковидні колонії в'язкої консистенції.

При посіві уколом в стовпчик желатину вібріон через 2 доби. При температурі 22- 23 С викликає розрідження з поверхні у вигляді бульбашки, потім воронкообразное і, нарешті, пошарове.

У молоці вібріон швидко розмножується, викликаючи через 24-48 год згортання, а потім настає пептонізація молока, і через 3-4 дні вібріон гине через зсув рН молока в кислу сторону.

Б. Хейберг по здатності ферментувати манозу, сахарозу і арабинозу розподілив все вібріони (холерні і холероподобние) на ряд груп, кількість яких нині становить 8.

Холерний вібріон відноситься до першої групи Хейберга.

Вібріони, подібні за морфологічними, культуральними та біохімічними ознаками з холерним, називали і називають по-різному: парахолернимі, холероподібний, НАГ-вібріонами (неагглютінірующіеся вібріони); вібріонами, що не відносяться до O1-групі. Остання назва найбільш точно підкреслює їхнє ставлення до холерного вібріона. Як було встановлено А. Гарднером і К. Венкат-Раманом, холерні і холероподобние вібріони мають загальний Н-антиген, але розрізняються по О-антигенів. За О-антигену холерні і холероподобние вібріони до теперішнього часу розподіляють на 139 О-серогрупи, але їх кількість постійно поповнюється. Холерний вібріон відноситься до О1 групи. Він має загальний А-антиген і два типоспецифічних антигену - В і С, за якими і розрізняють три серотипу V. Cholerae - серотип Огава (АВ), серотип Інаба (АС) і серотип Гікошіма (ABC). Холерний вібріон в стадії дисоціації має OR-антиген. У зв'язку з цим для ідентифікації V. Cholerae використовують О-сироватку, OR-сироватку і типоспецифічні сироватки Інаба і Огава.

У 1992-1993 рр. В Бангладеш, Індії, Китаї, Малайзії та інших країнах почалася велика епідемія холери, збудником якої виявився новий, раніше невідомий серовариантов виду Vibrio cholerae. Він відрізняється від V. Cholerae О1 за антигенними ознаками: має антиген 0139 і полисахаридную капсулу і не аглютинується ніякими іншими О-сироватками. Всі інші його морфологічні та біологічні властивості, включаючи здатність викликати холеру, т. Е. Синтезувати екзотоксин-холероген, виявилися подібними з властивостями V. Cholerae О1. Отже, виник, мабуть, внаслідок мутації, яка змінила О-антиген, новий збудник холери - V. Cholerae 0139. Він отримав назву V. Cholerae 0139 bengal.

Питання про ставлення так званих холероподобних вібріонів до V. Cholerae довгий час був не зрозумілий. Однак зіставлення V. Cholerae і холероподобних (НАГ-вібріонів) більш ніж по 70 ознаками виявило їх подібність на 90%, а ступінь гомології ДНК V. Cholerae і вивчених НАГ-вібріонів становить 70-100%. Тому холероподобние вібріони об'єднані в один вид з холерним вібріоном, від якого відрізняються головним чином за своїми О-антигенів, в зв'язку з чим їх називають вібріон не є 01-групи - V. Cholerae поп 01.

Вид V. Cholerae поділяють на 4 біотипів: V. Cholerae, V. Eltor, V. Proteus і V. Albensis. Протягом багатьох років обговорювалося питання про природу вібріона Ель-Тор. Цей вібріон був виділений в 1906 р Ф. Готшліхом на карантинній станції Ель-Тор з трупа паломника, який загинув від дизентерії. Ф. Готшліх виділив кілька таких штамів. За всіма властивостями вони не відрізнялися від холерного вібріона і агглютініровалісь холерної О-сироваткою. Але оскільки серед паломників в цей час холери не було, а тривале носійство холерного вібріона вважалося мало ймовірним, питання про можливу етіологічну роль V. Eltor при холері надовго залишився дискусійним. До того ж вібріон Ель-Тор, на відміну від V. Cholerae, мав гемолитическим дією. Однак в 1937 році цей вібріон викликав велику і важку епідемію холери на острові Сулавесі (Індонезія) з летальністю понад 60%. Нарешті, в 1961 році він став винуватцем 7-й пандемії, і в 1962 р питання про його холерної природі було вирішено остаточно. Відмінності між V. Cholerae і V. Eltor стосуються лише деяких ознак. За всіма іншими властивостями V. Eltor принципово не відрізняється від V. Cholerae. Крім того, тепер уже встановлено, що біотип V. Proteus (V.finklerpriori) включає в себе всю групу вібріонів, крім 01-групи (а нині і 0139), що називалися раніше НАГ-вібріонами. Біотип V. Albensis був виділений з річки Ельби і має здатність до фосфоресценції, проте втративши її, він нічим не відрізняється від V. Proteus. У зв'язку з цими даними в даний час вид Vibrio cholerae поділяють на 4 біотипів: V. Cholerae 01 cholerae, V. Cholerae eltor, V. Cholerae 0139 bengal і V. Cholerae non 01. Перші три відносяться до двох сероварам 01 і 0139. Останній біовар включає колишні біотипи V. Proteus і V. Albensis і представлений багатьма іншими сероварами вібріонів, що не агглютинируются 01- і 0139-сироватками, т. Е. НАГ-вібріонами.

Фактори патогенності холерного вібріона

[7], [8], [9], [10], [11], [12],

Хемотаксис холерного вібріона

За допомогою цих властивостей вібріон вступає у взаємодію з епітеліоцитами. У мутантів холерного вібріона (які втратили здатність до хемотаксису) вірулентність значно знижується, у мутантів Mob (втратили рухливість) або повністю зникає, або різко знижується.

Фактори адгезії і колонізації, за допомогою яких вібріон прилипає до Мікроворсинки і колонізує слизову оболонку тонкого кишечника. До факторів адгезії відносяться муциназа, розчинна гемаглютинін / протеаза, нейрамінідаза і ін. Вони сприяють адгезії і колонізації, так як руйнують речовини, що входять до складу слизу. Розчинна гемаглютинін / протеаза сприяє відділенню вібріонів від рецепторів епітеліоцитів і їх виходу з кишечника в зовнішнє середовище, забезпечуючи їм епідемічне поширення. Нейрамінідазу зміцнює зв'язок холерогена з епітеліоцитами і полегшує проникнення токсину всередину клітин, що посилює тяжкість діареї.

Холерний токсин - холероген.

Так звані нові токсини, які здатні викликати діарею, але не мають генетичного і імунологічного спорідненості з холерогену.

Дермонейротіческіе і геморагічні чинники. Природа цих токсичних факторів і їх роль в патогенезі холери вивчені недостатньо.

[13], [14], [15], [16], [17], [18]

Ендотоксини холерного вібріона

Ліпополісахариди V. Cholerae володіють сильним ендоток-сических властивістю і викликають загальну інтоксикацію організму.

Головний з перерахованих факторів патогенності холерного вібріона - екзотоксин холероген (СТХ АВ), який і зумовлює патогенез цієї хвороби. Молекула холерогена складається з двох фрагментів - А і В. Фрагмент А складається з двох пептидів - A1 і А2, він володіє специфічною властивістю холерного токсину і наділяє його якостями суперантігена. Фрагмент В складається з 5 однакових субодиниць. Він виконує дві функції: 1) розпізнає рецептор (моносіалогангліозід) ентероциту і зв'язується з ним; 2) формує внутрімембранний гідрофобний канал для проходження субодиниці А. Пептид А2 служить для зв'язування фрагментів А і В. Власне токсичну функцію виконує пептид Aj (АДФ-рібозілтрансфераза). Він взаємодіє з НАД, викликає його гідроліз; утворюється при цьому АДФ-рибоза зв'язується з регуляторною субодиницею аденілатциклази. Це веде до пригнічення гідролізу ГТФ. Виникає комплекс ГТФ + аденилатциклаза викликає гідроліз АТФ з утворенням цАМФ. (Інший шлях накопичення цАМФ - придушення холерогену ферменту, гідроліз цАМФ до 5-АМФ). Прояв Функції гена ctxAB, що кодує синтез екзотоксину, залежить від функції ряду Інших генів патогенності, зокрема генів tcp (кодують синтез токсин-контрольованих пілей адгезії - ТКПА), регуляторних генів toxR, toxS і toxT, генів hap (розчинної гемагглютенін / протеази) і пий (нейрамінідази). Тому генетичний контроль патогенності V. Cholerae має складний характер.

Як з'ясувалося, в хромосомі V. Cholerae є два острови патогенності. Один з них являє собою геном нитевидного помірного конвертує фага СТХф, а інший - геном теж нитевидного помірного конвертує фага VPIcp. Кожен з цих островів патогенності містить касети генів зазначених профазі, які і визначають патогенність збудника холери. Профаг СТХф несе гени СТХ, гени нових токсинів zot і асі, ген сер (синтез адгезини), ген ortU (синтез продукту з невідомою функцією). У цю ж касету входять ген пий і область фага RS2, яка кодує реплікацію, а також інтеграцію профага в хромосоми. Гени zot, асі і ortU необхідні для формування фагових віріонів при виключенні профага з хромосоми збудника.

Профаг VPIcp несе гени tcp (кодують продукцію пілей (білок ТКПА)), гени toxT, toxR, act (додатковий фактор колонізації, гени мобільності (інтеграли і транспозази)). Транскрипцію генів вірулентності регулюють три гена-регулятора: toxR, toxS і toxT. Ці гени координовано, на рівні транскрипції, змінюють активність більше 20 генів вірулентності, включаючи гени ctxAB, tcp і ін. Головним геном-регулятором служить ген toxR. Його пошкодження або відсутність призводять до авірулентності або до зниження продукції холерного токсину СТХ і ТКПА більш ніж в 100 разів. Можливо, таким чином регулюється координоване вираз генів вірулентності в островах патогенності, утворених помірними конвертується фагами і у інших видів бактерій. Встановлено, що в хромосомі V. Cholerae eltor присутній ще один профаг К139, але його геном мало вивчений.

Ген hap локалізована на хромосомі. Таким чином, вірулентність (патогенність) і епідемічну здатність V. Cholerae визначають 4 гена: ctxAB, tcp, toxR і hap.

Для виявлення здатності V. Cholerae продукувати холероген можна використовувати різні методи.

Біологічна проба на кроликах. При внутрішньом'язовому введенні холерних вібріонів кроликам-шмаркачів (вік не більше 2 тижнів.) У них розвивається типовий холерний синдром: діарея, зневоднення і загибель кролика.

Безпосереднє виявлення холерогена за допомогою ПЛР, ІФМ або реакції пасивного імунного гемолізу (холероген зв'язується з Gmj еритроцитів, і вони при додаванні антитоксических антитіл і комплементу лизируются). Однак виявлення тільки здатності продукувати токсин недостатньо для визначення епідемічної небезпеки таких штамів. Для цього необхідно виявити наявність гена hap, тому краще і надійніше за все диференціювати токсигенні і епідемічні штами холерних вібріонів серогрупи 01 і 0139 за допомогою ПЛР із застосуванням специфічних праймерів для виявлення всіх 4 генів патогенності: ctxAB, tcp, toxR і hap.

Здатність V. Cholerae, що не відносяться до серогрупи 01 або 0139, викликати спорадичні або групові діарейні захворювання у людей може бути пов'язана або з наявністю у них ентеротоксінов типу LT або ST, що стимулюють аденилат або гуанілатціклазние системи відповідно, або з наявністю тільки генів ctxAB, але відсутністю гена hap.

Під час сьомої пандемії виділялися штами V. Cholerae з різним ступенем вірулентності: холерогену (вірулентні), слабо холерогену (маловірулентние) і нехолерогенние (невірулентние). Нехолерогенние V. Cholerae, як правило, виявляють гемолітичну активність, яка не лизируются холерним діагностичним фагом ХДФ (5) і не викликають захворювання людини.

Для фаготипирования V. Cholerae 01 (в тому числі і ельтор) С. Мукерджі були запропоновані набори фагів, які потім в Росії були доповнені іншими фагами. Набір таких фагів (1-7) дозволяє виділити серед V. Cholerae 0116 фаготип. Для идентифицирования токсигенних і нетоксигенних V. Cholerae ельтор замість ХДФ-3, ХДФ-4 і ХДФ-5 тепер в Росії запропоновані фаги СТХ * (лизируют токсигенні вібріони ельтор) і СТХ "(лизируют нетоксігенние вібріони ельтор).

[19], [20], [21],

Резистентність збудників холери

Холерні вібріони добре виживають при низькій температурі; в льоду зберігають життєздатність до 1 міс; в морській воді - до 47 діб., у річковій - від 3-5 днів до декількох тижнів, в кип'яченої мінеральній воді зберігаються більше 1 року, в грунті - від 8 днів до 3 міс, в свіжих випорожненнях - до 3 діб., на варених продуктах (рис, локшина, м'ясо, каші та ін.) виживають 2-5 днів, на сирих овочах - 2-4 дня, на фруктах - 1-2 дня, в молоці і молочних продуктах - 5 днів; при зберіганні на холоді термін виживання збільшується на 1-3 дні; на полотняному білизна, забрудненому випорожненнями, зберігаються до 2 діб., а на вологому матеріалі - тиждень. Холерні вібріони при температурі 80 ° С гинуть через 5 хв, при 100 ° С - моментально; високочутливі до кислот; під впливом хлораміну та інших дезінфектантів гинуть через 5-15 хв. Вони чутливі до висушування і дії прямих сонячних променів, але добре і довго зберігаються і навіть розмножуються у відкритих водоймах і стічних водах, багатих органічними речовинами, що мають лужну рН і температуру вище 10- 12 ° С. Високочутливі до хлору: доза активного хлору 0,3-0,4 мг / л води за 30 хв викликає надійне знезараження від холерного вібріона.

Патогенні для людини вібріони, які не відносяться до виду Vibrio Cholerae

До роду Vibrio відноситься більше 25 видів, з яких крім V. Cholerae принаймні наступні вісім здатні викликати захворювання у людей: V. Раrаhaemolyticus, V. Alginolyticus, V. Vulnificus, V. Fluvialis, V. Fumissii, V. Mimicus, V . Damsela і V. Hollisae. Всі ці вібріони є мешканцями морів і заток. Зараження ними відбувається або при купанні, або при вживанні в їжу продуктів морського походження. Як з'ясувалося, холерні і не холерні вібріони можуть викликати не тільки гастроентериту, але і ранові інфекції. Ця здатність виявлена у V. Cholerae 01- і не 01-груп, у V. Parahaemolyticus, V. Alginolyticus, V. Mimicus, V. Damsela і V. Vulnificus. Вони викликають запальні процеси в м'яких тканинах при пошкодженні їх панциром морських тварин або при прямому контакті з інфікованою морською водою.

З числа перерахованих патогенних нехолерной вібріонів найбільший практичний інтерес представляють V. Parahaemolyticus, V. Alginolyticus, V. Vulnificus і V. Fluvialis.

V. Parahaemolyticus - парагемолітічеських вібріон - вперше був виділений в Японії в 1950 р під час великого спалаху харчової токсикоінфекції, викликаної вживанням полувисушенних сардин (летальність склала 7,5%). Належність збудника до роду Vibrio була встановлена Р. Саказакі в 1963 р Він розділив вивчені штами на 2 види: V. Parahaemolyticus і V. Alginolyticus. Обидва види виявляються в прибережній морській воді і у її мешканців, вони є галофили (грец. Hals - сіль); на відміну від звичайних вібріонів, галофільні не ростуть на середовищах без NaCl і добре розмножуються при високих концентраціях її. Видову приналежність галофільних вібріонів визначають за їхньою здатністю ферментувати сахарозу, утворювати ацетілметілкарбінол, розмножуватися в ПВ з 10% NaCl. Всі ці ознаки властиві увазі V. Alginolyticus, але відсутні у V. Parahaemolyticus.

Парагемолітічеських вібріон має три типи антигенів: термолабільние жгутикові Н-антигени, термостабільні, не руйнуються при нагріванні до 120 ° С протягом 2 год О-антигени і поверхневі К-антигени, що руйнуються при нагріванні. Свежевиделенние культури V. Parahaemolyticus мають добре виражені К-антигени, які оберігають живі вібріони від аглютинації гомологічними О-сироватками. Н-антигени у всіх штамів однакові, але Н-антигени монотріхі відрізняються від Н-антигенів перітріхі. За О-антигену V. Parahaemolyticus поділяють на 14 серогруп. Усередині серогрупп вібріони поділяють на серотипи по К-антигенів, загальна кількість яких становить 61. Антигенна схема V. Parahaemolyticus розроблена стосовно тільки до його штамів, які виділяються від людей.

Патогенність V. Parahaemolyticus пов'язана цього здатністю синтезувати гемолізин, що володіє ентеротоксіческімі властивістю. Останнє виявляється за допомогою методу Канагави. Сутність його полягає в тому, що патогенні для людини V. Parahaemolyticus викликають чіткий гемоліз на кров'яному агарі, що містить 7% NaCl. На кров'яному агарі, що містить менше 5% NaCl, гемоліз викликають багато штамів V. Parahaemolyticus, а на кров'яному агарі з 7% NaCl - тільки штами з ентеропатогенними властивостями. Парагемолітічеських вібріон виявлено на узбережжях Японського, Каспійського, Чорного та інших морів. Він викликає харчові токсикоінфекції та дізентеріеподобние захворювання. Зараження відбувається при вживанні в їжу сирих або напівсирих морських продуктів, інфікованих V- parahaemolyticus (морська риба, устриці, ракоподібні і т. П.).

Серед вище зазначених восьми видів нехолерной вібріонів найбільш патогенним для людини є V. Vulnificus, який вперше був описаний в 1976 р як Beneckea vulnificus, а потім в 1980 р перекласифікований в Vibrio vulnificus. Він часто виявляється в морській воді і її мешканців і служить причиною різних захворювань людини. Штами V. Vulnificus морського і клінічного походження не відрізняються один від одного ні фенотипически, ні генетично.

Ранові інфекції, викликані V. Vulnificus, швидко прогресують і ведуть до утворення пухлин з наступним некрозом тканини, супроводжуються лихоманкою, ознобом, іноді сильними болями, в деяких випадках вимагають ампутації.

V. Vulnificus виявлена здатність продукувати екзотоксин. У дослідах на тваринах встановлено, що збудник викликає сильні місцеві пошкодження з розвитком набряку і некрозу тканини з наступним летальним результатом. Роль екзотоксину в патогенезі хвороби вивчається.

Крім ранових інфекцій, V. Vulnificus може викликати пневмонію у тонули людей і ендометрити у жінок після перебування їх в морській воді. Найбільш важкою формою інфекції, спричиненої V. Vulnificus, є первинна септицемія, пов'язана з вживанням в їжу сирих устриць (можливо, і інших морських тварин). Це захворювання розвивається дуже швидко: у хворого з'являються нездужання, лихоманка, озноб і прострація, потім сильна гіпотонія, що є головною причиною смерті (летальність близько 50%).

V. Fluvialis вперше як збудник гастроентериту був описаний в 1981 р Він відноситься до підгрупи нехолерной патогенних вібріонів, у яких є аргінінді-гідролаза, але неторнітін- і лізіндекарбоксілаз (V. Fluvialis, V. Furnissii, V. Damsela, т. Е. Фенотипически схожих з Aeromonas). V. Fluvialis - частий збудник гастроентеритів, які супроводжуються сильною блювотою, проносом, абдомінальними болями, підвищенням температури і сильною або середньої тяжкості дегідратацією. Головним фактором патогенності є ентеротоксин.

Епідеміологія холери

Основним джерелом інфекції є тільки людина - хворий на холеру або вібріононосій, а також забруднена ними вода. Ніякі тварини в природі холеру не хворіють. Спосіб зараження - фекально-оральний. Шляхи зараження: а) основний - через воду, що використовується для пиття, купання та господарсько-побутових потреб; б) контактно-побутовий і в) через їжу. Всі великі епідемії і пандемії холери були пов'язані з водою. Холерні вібріони володіють такими пристосувальними механізмами, які забезпечують існування їх популяцій як в організмі людини, так і в певних екосистемах відкритих водойм. Рясна діарея, яку викликає холерний вібріон, призводить до очищення кишечника від конкуруючих бактерій і сприяє значному поширенню збудника в навколишньому середовищі, перш за все в стічних водах і у відкритих водоймах, куди їх скидають. Людина, хворий на холеру, виділяє збудника в величезній кількості - від 100 млн до 1 млрд на 1 мл випорожнень, вібріононосій виділяє 100-100 000 вібріонів в 1 мл, що заражає доза становить близько 1 млн вібріонів. Тривалість виділення холерного вібріона у здорових носіїв становить від 7 до 42 днів і 7-10 днів у перехворілих. Більш тривалий виділення спостерігається вкрай рідко.

Особливістю холери є те, що після неї, як правило, не залишається тривалого носійства і не формується стійких ендемічних вогнищ. Однак, як вже зазначалося вище, в зв'язку з забрудненням відкритих водойм стічними водами, що містять у великій кількості органічні речовини, мийні засоби і поварену сіль, в літню пору холерний вібріон в них не тільки довго виживає, але навіть і розмножується.

Важливе епідеміологічне значення має той факт, що холерні вібріони 01-групи, як нетоксігенние, так і токсигенні, можуть тривалий час зберігатися в різних водних екосистемах у вигляді некультивованих форм. За допомогою ланцюгової полімеразної реакції при негативних бактеріологічних дослідженнях на ряді ендемічних територій СНД в різних водоймах були виявлені vct-гени некультивованих форм V. Chokrae.

Ендемічним осередком холерного вібріона Ель-Тор є Індонезія, вихід з неї цього винуватця сьомий пандемії пов'язаний, як вважають, з розширенням економічних зв'язків Індонезії з зовнішнім світом після набуття нею незалежності, а на тривалість і блискавичний розвиток пандемії, особливо її другої хвилі, вирішальний вплив надали відсутність імунітету до холери і різні соціальні потрясіння в країнах Азії, Африки і Америки.

При виникненні захворювань холерою здійснюють комплекс протиепідемічних заходів, серед яких провідним і вирішальним є активне своєчасне виявлення та ізоляція (госпіталізація, лікування) хворих в гострій і атипової формі і здорових вібріононосіїв; вживаються заходи щодо припинення можливих шляхів поширення інфекції; особлива увага приділяється водопостачання (хлорування питної води), дотримання санітарно-гігієнічного режиму на харчових підприємствах, в дитячих установах, місцях громадського користування; здійснюється строгий контроль, в тому числі бактеріологічний, за відкритими водоймами, проводиться імунізація населення і т. П.

[22], [23], [24], [25], [26],

Симптоми холери

Інкубаційний період при холері варіює від декількох годин до 6 діб., Найчастіше - 2-3 дня. Потрапивши в просвіт тонкого кишечника, холерні вібріони за рахунок рухливості і хемотаксису до слизової оболонки направляються до слизу. Щоб проникнути через неї, вібріони виробляють ряд ферментів: нейраминидазу, муциназа, протеази, лецитиназу, які руйнують речовини, що містяться в слизу, і полегшують просування вібріонів до епітеліальних клітин. Шляхом адгезії вібріони прикріплюються до глікокаліксу епітелію і, втрачаючи рухливість, починають інтенсивно розмножуватися, колонізіруя микроворсинки тонкого кишечника (див. Кол. Вкл., Рис. 101.2), і одночасно виробляти велику кількість екзотоксину-холерогена. Молекули холерогена зв'язуються з моносіалогангліозідом Gni! І проникають в мембрану клітини, де активують аденилатциклазную систему, а накопичується цАМФ викликає гіперсекреція рідини, катіонів та аніонів Na, HCO, Кl, Сl з ентероцитів, що і призводить до холерної діареї, зневоднення і знесолення організму. Розрізняють три типи перебігу хвороби:

• бурхливий, важке зневоднює діарейних захворювань, що приводить до смерті хворого через кілька годин;
• менш важкий перебіг, або пронос без зневоднення;
• безсимптомний перебіг захворювання (вибриононосительство).

При важкій формі холери у хворих з'являється пронос, випорожнення частішають, випорожнення стають все більш рясними, приймають водянистий характер, втрачають фекальний запах і мають вигляд рисового відвару (каламутна рідина з плаваючими в ній залишками слизу і клітинами епітелію). Потім приєднується виснажлива блювота, спочатку вмістом кишечника, а потім блювотні маси набувають вигляду рисового відвару. Температура у хворого падає нижче норми, шкіра стає синюшного, зморшкуватою і холодної - холерний алгід. В результаті зневоднення відбувається згущення крові, розвивається ціаноз, кисневе голодування, різко страждає функція нирок, з'являються судоми, хворий втрачає свідомість і настає смерть. Летальність від холери під час сьомої пандемії варіювала від 1,5% в розвинених країнах до 50% в країнах, що розвиваються.

Постінфекційний імунітет міцний, тривалий, повторні захворювання спостерігаються рідко. Імунітет антитоксичний і антимікробний, обумовлений антитілами (антитоксинів зберігаються довше, ніж антимікробні антитіла), клітинами імунної пам'яті і фагоцитами.

Лабораторна діагностика холери

Основним і вирішальним методом діагностики холери є бактеріологічний. Матеріалом для дослідження від хворої служать випорожнення і блювотні маси; на вибриононосительство досліджують випорожнення; у осіб, які загинули від холери, для дослідження беруть лігувати відрізок тонкого кишечника і жовчний міхур; з об'єктів зовнішнього середовища найчастіше досліджують воду відкритих водойм і стічні води.

При проведенні бактеріологічного дослідження необхідно дотримуватися таких три умови:

• якомога швидше провести посів матеріалу від хворого (холерний вібріон зберігається в випорожненнях короткий термін);
• посуд, в яку беруть матеріал, не повинна знезаражуватися хімічними речовинами і не повинна містити їх сліди, так як холерний вібріон до них дуже чутливий;
• виключити можливість забруднення і зараження оточуючих.

Виділення культури проводять за схемою: посів на ПВ, одночасно на лужний МПА або яку-небудь виборчу середу (найкраще TCBS). Через 6 год досліджують плівку, що утворюється на ПВ, і в разі необхідності роблять пересів на другу ПВ (висеваемость холерного вібріона в цьому випадку підвищується на 10%). З ПВ роблять пересів на лужний МПА. Підозрілі колонії (стекловидно-прозорі) пересівають для отримання чистої культури, яку ідентифікують за морфологічними, культуральними, біохімічними властивостями, рухливості і остаточно типують за допомогою діагностичних агглютинирующих сироваток О, OR-, Інаба і Огава і фагів (ХДФ). Запропоновано різні варіанти прискореної діагностики, найкращим з них є люмінесцентно-серологічний метод. Він дозволяє виявити холерний вібріон безпосередньо в досліджуваному матеріалі (або після попереднього підрощування в двох пробірках з 1% -ної ПВ, в одну з яких додають холерний фаг) протягом 1,5-2 ч. Для прискореного виявлення холерного вібріона Нижньогородським ІЕМ запропонований набір паперових індикаторних дисків, що складаються з 13 біохімічних тестів (оксидаза, індол, уреаза, лактоза, глюкоза, сахароза, манноза, арабиноза, маніт, інозит, аргінін, орнітин, лізин), які дозволяють диференціювати представників роду Vibrio від пологів Aeromon as, Plesiomonas, Pseudomonas, Comamonas і від сімейства Enterobacteriaceae. Для швидкого виявлення холерного вібріона в екскрементах і в об'єктах зовнішнього середовища може бути використана РПГА з антитільним діагностикумів. З метою виявлення некультивованих форм холерного вібріона в об'єктах зовнішнього середовища застосовують тільки метод ланцюгової полімеразної реакції.

У тих випадках, коли виділяються V. Cholerae НЕ Ol-групи, вони повинні бути тіпірованних за допомогою відповідних агглютинирующих сироваток інших серогруп. Виділення від хворого на діарею (в тому числі холероподібний) V. Cholerae НЕ Ol-групи вимагає проведення таких же протиепідемічних заходів, як і в разі виділення V. Cholerae Ol-групи. При необхідності у таких вібріонів за допомогою ПЛР визначають наявність генів патогенності ctxAB, tcp, toxR і hap.

Серологічна діагностика холери має допоміжний характер. З цією метою може бути використана реакція аглютинації, але краще - визначення титру вібріоцидних антитіл або антитоксинів (антитіла до холерогену визначають імуноферментним або імунофлуоресцентний методами).

Лабораторна діагностика нехолерной патогенних вібріонів

Основним методом діагностики захворювань, що викликаються нехолерной патогенними вібріонами, є бактеріологічний з використанням таких селективних середовищ, як TCBS, Мак-Конки і ін. Приналежність виділеної культури до роду Vibrio визначають на підставі ключових ознак бактерій цього роду.

Лікування холери

Лікування хворих на холеру має полягати насамперед у регидратации і відновленні нормального водно-сольового обміну. З цією метою рекомендується використовувати сольові розчини, наприклад такого складу: NaCl - 3,5; NaHC03 - 2,5; КС1 - 1,5 і глюкоза - 20,0 г на 1 л води. Таке патогенетично обгрунтоване лікування в поєднанні з раціональною антибиотикотерапией дозволяє знизити летальність при холері до 1% і менше.

Специфічна профілактика холери

Для створення штучного імунітету була запропонована щеплення від холери, в тому числі з убитих штамів Інаба і Огава; холероген-анатоксин для підшкірного застосування і ентеральна хімічна бівалентна вакцина, що складається з анатоксину і соматичних антигенів серотипів Інаба і Огава, так як перехресний імунітет не формується. Однак тривалість поствакцинального імунітету становить не більше 6-8 міс, тому щеплення проводять тільки за епідемічними показаннями. В осередках холери непогано зарекомендувала себе антибіотикопрофілактика, зокрема тетрацикліном, до якого холерний вібріон проявляє високу чутливість. З такою ж метою можуть бути використані і інші ефективні проти V. Cholerae антибіотики.