Конфокальна мікроскопія

Конфокальна мікроскопія сьогодні вважається одним з найбільш перспективних методів візуалізації шкіри in vivo, тому інтерес до нього як серед клініцистів, так і серед представників науково-дослідних інститутів надзвичайно високий.

[1], [2], [3], [4]

Можливості конфокальної мікроскопії

У дерматології конфокальную лазерну мікроскопію використовують для:

• вивчення пенетрации з'єднань в шкіру (шляхів проникнення, кінетики, розподілу в шкірі);
• спостереження за роботою залоз (визначення активного і пасивного стану);
• дослідження мікроциркуляторного русла (в тому числі і в режимі реального часу);
• діагностики новоутворень.

Чи не обговорюючи переваги і недоліки зазначених вище різновидів конфокальної мікроскопії, відзначимо, що в останні роки все більшу популярність завойовує флуоресцентна лазерна конфокальна мікроскопія.

[5], [6], [7],

Конфокальна мікроскопія для дослідження шкіри

Конфокальний мікроскоп дає дві неоціненні можливості - дослідження тканин на клітинному рівні в стані фізіологічної життєдіяльності та демонстрації результатів дослідження (т. Е. Клітинної активності) в чотирьох вимірах - висота, ширина, глибина і час. Для якості зображення і глибини дослідження найбільш важливу роль відіграє здатність тканини до пропускання світла, інакше кажучи, її прозорість. Метод конфокальної мікроскопії - безконтактний, промінь світла не приносить ніякої шкоди чи дискомфорту обстежуваному пацієнтові або експериментальному тварині.

Для дослідження шкіри використовують конфокальную сканує лазерну мікроскопію (confocal scanning laser microscopy, CSLM). Метод дозволяє побачити епідерміс і сосочковий шар дерми з дозволом, наближеним до гістологічного. Всі результати обстеження відображаються на моніторі і зберігаються у вигляді пакету файлів із зображеннями (у вигляді мікрофільмів (в динаміці) або мікрофотографій).

Є два різновиди методу:

• відбивна (reflectance CSLM) - заснована на тому, що різні внутрішньоклітинні і міжклітинні структури мають різний індекс заломлення світла, що дозволяє отримувати контрастне зображення.
• флуоресцентна (fluorescence CSLM) - використовує лазерний світло, що проникає в шкіру і збудливий в ній екзо або ендохромофори, які у відповідь починають випромінювати фотони (т. Е. Флуоресцировать).

Латеральное дозвіл - мінімальна відстань між точками, розташованими на горизонтальній площині, тобто площині, паралельній поверхні шкіри. Аксіальне дозвіл - мінімальна відстань між точками, розташованими на площині, перпендикулярній поверхні шкіри.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Історія конфокальної мікроскопії

Ідея створення мікроскопа, здатного на клітинному рівні показати прижиттєвий зріз живої тканини, активно розроблялася ще 130 років тому. Основний елемент сучасних мікроскопів був сконструйований в кінці XIX століття і представляв собою обертовий диск з дрібними отворами, розташованими по спіралі. Цей диск був винайдений в 1883 році німецьким студентом Паулем Ніпковим, в честь якого і отримав свою назву - диск Нипкова (або Ніпков-диск). Винахід було засновано на здатності світла, проходячи через дрібні отвори в диску і збільшувальну лінзу, проникати в глибину тканини і висвітлювати фрагмент клітини на видаленні від поверхні. При швидкому обертанні диска фрагменти складаються в загальну картинку. За рахунок видалення або наближення конструкції об'єкта можна варіювати глибину оптичного зрізу досліджуваної тканини.

Тільки з появою відеомагнітофонів в 1980-х і комп'ютерів, здатних обробляти зображення, на початку 1990-х років з'явилася реальна можливість створити і ефективно застосувати ті сучасні мікроскопи, які використовуються в наш час.