ПЛР як метод діагностики генетичних захворювань
Останній перегляд: 23.04.2024
Весь контент iLive перевіряється медичними експертами, щоб забезпечити максимально можливу точність і відповідність фактам.
У нас є строгі правила щодо вибору джерел інформації та ми посилаємося тільки на авторитетні сайти, академічні дослідницькі інститути і, по можливості, доведені медичні дослідження. Зверніть увагу, що цифри в дужках ([1], [2] і т. д.) є інтерактивними посиланнями на такі дослідження.
Якщо ви вважаєте, що який-небудь з наших матеріалів є неточним, застарілим або іншим чином сумнівним, виберіть його і натисніть Ctrl + Enter.
ПЛР - нове досягнення молекулярної генетики, використовується для ампліфікації ДНК і дозволяє швидко розмножити in vitro специфічний ділянку ДНК (тобто будь-яке ген) більш ніж в 200 000 разів. Щоб провести реакцію, досить мати ДНК-матеріал однієї клітини; кількість ампліфікованої за допомогою ПЛР ДНК настільки велике, що цю ДНК можна просто фарбувати (використання радіоактивних зондів після електрофорезу не потрібно). Необхідна умова для проведення ПЛР - знання нуклеотидної послідовності ампліфіціруемого області ДНК для правильного підбору штучно синтезованих праймерів.
В даний час ПЛР являє собою процес, що протікає в одній пробірці і складається з повторних циклів ампліфікації (розмноження, копіювання) специфічної послідовності молекули ДНК з метою отримання досить великої кількості копій, які можуть бути ідентифіковані шляхом електрофорезу. Один з ключових компонентів реакції - «праймери» - синтетичні олігонуклеотиди, що складаються з 20-30 підстав, комплементарних «сайтам» (ділянкам) відпалу (приєднання) на ідентифікованим ділянці матричної ДНК.
ПЛР протікає автоматично в програмованому термостаті - термоциклері (ампліфікаторі). Триступеневий цикл, в результаті якого виходять точні копії ідентифікованого ділянки матричної ДНК, повторюють 30-50 разів відповідно до заданої програми термоциклері. У першому циклі олігопраймери гибрідизуючою з вихідної матричної ДНК, а потім (в наступних циклах) і з знову синтезованими молекулами ДНК в міру їх накопичення в реакційній суміші. В останньому випадку синтез ДНК закінчується не внаслідок зміни температурного режиму, а після досягнення ДНК-полімеразної кордону амплифицированного ділянки, що і визначає розмір знову синтезованого ділянки ДНК з точністю до одного нуклеотиду.
В якості методу детекції отриманих молекул ДНК використовують електрофорез, за допомогою якого проводиться поділ ампліфі-царювати матеріалу за розміром амплікон (продуктів ампліфікації).
За допомогою ПЛР можна безпосередньо дослідити місця локалізації передбачуваних мутацій або поліморфних сайтів, а також вивчати наявність будь-яких інших специфічних особливостей ДНК.
[