Медичний експерт статті
Нові публікації
ПЛР як метод діагностики генетичних захворювань
Останній перегляд: 04.07.2025
Весь контент iLive перевіряється медичними експертами, щоб забезпечити максимально можливу точність і відповідність фактам.
У нас є строгі правила щодо вибору джерел інформації та ми посилаємося тільки на авторитетні сайти, академічні дослідницькі інститути і, по можливості, доведені медичні дослідження. Зверніть увагу, що цифри в дужках ([1], [2] і т. д.) є інтерактивними посиланнями на такі дослідження.
Якщо ви вважаєте, що який-небудь з наших матеріалів є неточним, застарілим або іншим чином сумнівним, виберіть його і натисніть Ctrl + Enter.
ПЛР – це нове досягнення молекулярної генетики, що використовується для ампліфікації ДНК і дозволяє швидко розмножувати in vitro певну ділянку ДНК (тобто будь-який ген, що цікавить) понад 200 000 разів. Для проведення реакції достатньо мати ДНК-матеріал з однієї клітини; кількість ДНК, ампліфікованої за допомогою ПЛР, настільки велика, що цю ДНК можна просто забарвити (використання радіоактивних зондів після електрофорезу не потрібне). Обов'язковою умовою проведення ПЛР є знання нуклеотидної послідовності ампліфікованої ділянки ДНК для правильного підбору штучно синтезованих праймерів.
Наразі ПЛР – це однопробірковий процес, що складається з повторюваних циклів ампліфікації (відтворення, копіювання) певної послідовності молекули ДНК з метою отримання достатньо великої кількості копій, які можна ідентифікувати за допомогою електрофорезу. Одним з ключових компонентів реакції є «праймери» – синтетичні олігонуклеотиди, що складаються з 20-30 основ, комплементарних «сайтам» (областям) відпалу (приєднання) на ідентифікованій ділянці матричної ДНК.
ПЛР відбувається автоматично в програмованому термостаті - термоциклері (ампліфікаторі). Триетапний цикл, в результаті якого отримують точні копії ідентифікованої ділянки матричної ДНК, повторюється 30-50 разів відповідно до заданої програми термоциклера. У першому циклі олігопраймери гібридизуються з вихідною матричною ДНК, а потім (у наступних циклах) з новосинтезованими молекулами ДНК у міру їх накопичення в реакційній суміші. В останньому випадку синтез ДНК завершується не в результаті зміни температури, а при досягненні ДНК-полімеразної межі ампліфікованої ділянки, яка визначає розмір новосинтезованої ділянки ДНК з точністю до одного нуклеотиду.
Електрофорез використовується як метод детекції отриманих молекул ДНК, за допомогою якого ампліфікований матеріал розділяється за розміром ампліконів (продуктів ампліфікації).
ПЛР може бути використана для безпосереднього дослідження місць розташування підозрюваних мутацій або поліморфних сайтів, а також для вивчення наявності будь-яких інших специфічних ознак ДНК.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]