Вітамін А в крові

Референтні значення (норма) концентрації вітаміну А (ретинолу) у сироватці крові: у дітей 1-6 років - 0,7-1,5 мкмоль/л, 7-12 років - 0,91-1,71 мкмоль/л, 13-19 років - 0,91-2,51 мкмоль/л; у дорослих - 1,05-2,09 мкмоль/л.

Вітамін А – це жиророзчинний вітамін, який існує у двох формах: сам вітамін А, або ретинол (міститься лише в продуктах тваринного походження), та провітамін А, відомий як каротин (отримується з продуктів тваринного та рослинного походження), який може перетворюватися на ретинол у стінках травного тракту. Приблизно 50-90% ретинолу, що надходить з їжею, абсорбується в тонкому кишечнику та транспортується в комплексі, зв'язаному з хіломікронами, до печінки, де зберігається у вигляді ретинолу пальмітату. За потреби він вивільняється в кров у вигляді ретинолу в комплексі з вітамін А-зв'язуючим білком. У сироватці крові комплекс вітамін А-зв'язуючого білка + ретинолу зв'язується з транстиретином. З сироватки крові ретинол поглинається клітинами-мішенями, такими як фоторецептори сітківки та епітелію.

Коли організм отримує вітамін А в кількостях, що перевищують потреби (180-430 мкг ретинолу на добу залежно від віку, статі та фізіологічного стану), його надлишок відкладається в печінці, утворюючи депо цього вітаміну. При зниженні надходження ретинолу з їжею його запаси з печінки вивільняються в кров, підтримуючи концентрацію ретинолу в сироватці крові на нормальному рівні (вище 0,7 мкмоль/л). Інші біологічно активні форми вітаміну А (ретинал та ретиноєва кислота) присутні в крові в дуже низьких концентраціях (нижче 0,35 мкмоль/л); ефіри ретинолу становлять приблизно 5% від загальної кількості вітаміну А (0,1-0,17 мкмоль/л).

Вітамін А відіграє важливу роль в окисно-відновних процесах. Ретинол сприяє утворенню глікогену в печінці та м'язах, допомагає підвищити вміст холестерину в крові та бере участь у синтезі стероїдних та статевих гормонів. Він необхідний для росту та формування скелетної системи, ресинтезу родопсину, а також сприяє нормальному функціонуванню слизових оболонок та покривного епітелію шкіри, запобігаючи її метаплазії, гіперкератозу та надмірному лущенню. Вітамін А сприяє зміцненню волосся, зубів та ясен. В останні роки було показано різноманітну роль вітаміну А в профілактиці раку та регуляції імунітету (він необхідний для завершення фагоцитозу, збільшує синтез Ig, стимулює утворення Т-кілерів, стимулює Т-хелпери II типу тощо). Вітамін А є активним антиоксидантом, який діє переважно у присутності вітаміну Е; він захищає вітамін С від окислення. Дефіцит вітаміну А вважається фактором ризику злоякісних новоутворень. Експериментальні дослідження показали, що збільшення вмісту вітаміну А в раціоні збільшує середню тривалість життя на 17,5%. Цинк є важливим кофактором у метаболізмі вітаміну А (необхідний для синтезу білка, що зв'язує вітамін А).

Середня добова потреба в ретинолі для дорослих (20-50 років) становить 1,2 мг (4000 МО, 1 МО еквівалентно 0,3 мкг ретинолу), для вагітних жінок - 1,5 мг (5000 МО), для жінок, що годують грудьми - 1,8 мг (6000 МО), для людей старше 60 років - 2,5 мг (10 000 МО). Принаймні третина добової потреби в ретинолі повинна надходити в організм у готовому вигляді; решту можна покрити, вживаючи каротиноїди, з яких ретинол утворюється в організмі. Слід враховувати, що приблизно 30% ретинолу в харчових продуктах руйнується під час термічної обробки. Активність ретинолу в 2 рази вища, ніж у каротину, крім того, лише 30-40% останнього всмоктується в кишечнику. Тому при оцінці раціону вважається, що 1 мг ретинолу приблизно еквівалентний 6 мг каротиноїдів.

Визначення ретинолу (вітаміну А) та каротиноїдів у сироватці крові за методом Бессі у модифікації Л.А. Анісімової

Принцип методу

Визначення вітаміну А та каротиноїдів базується на їх гідролізі в лужному спиртовому розчині з подальшою екстракцією сумішшю органічних розчинників.

Реагенти

• 11 М розчин гідроксиду калію (KOH).
• 96% етиловий спирт.
• 1 М розчин гідроксиду калію (KOH) у 96% етиловому спирті: 1 об'єм 11 М розчину KOH змішують з 10 об'ємами 96% етилового спирту. Реагент готують у день дослідження. Якщо під час змішування виникає забарвлення, спирт слід очистити дистиляцією перед використанням.
• Ксилол, хімічно чистий
• Октан, хімічно чистий
• Ксилол-октанова суміш: готується шляхом змішування рівних об'ємів ксилолу та октану.

Дослідження проводяться за допомогою спектрофотометра.

Процес визначення вітаміну А

Кров, взяту з пальця (близько 1 мл), поміщають у центрифужну пробірку та поміщають у скляну чашку з теплою водою (температура 40-45°C) на 20-30 хвилин. Для відділення сироватки кров'яний згусток обережно проводять по краю стінок пробірки тонкою скляною паличкою та центрифугують при 3000 об/хв протягом 10 хвилин.

Збирають 0,12 мл сироватки та переносять у пробірку для аглютинації, куди потім додають 0,12 мл 1 М спиртового розчину гідроксиду калію. Вміст ретельно струшують.

Пробірки зі зразками поміщають у водяну баню на 20 хвилин за температури 60°C для проведення гідролізу.

Зразки охолоджують і додають до них 0,12 мл ксилол-октанової суміші, після чого енергійно струшують протягом 10-15 с. Знову охолоджують і центрифугують.

Верхній шар, що містить вітамін А та каротиноїди, обережно видаляють за допомогою пастерівської піпетки з гумовою грушею та переносять у мікрокювети.

Зразки спектрофотометрують при довжині хвилі 328 нм для визначення вітаміну А та при довжині хвилі 460 нм для визначення каротиноїдів.

Після спектрофотометрії зразки піддають впливу ультрафіолетового випромінювання для руйнування вітаміну А. Для цього на відстані 15-20 см від мікрокювет встановлюють кварцову (бактерицидну) лампу таким чином, щоб частина кювети, заповнена рідиною, піддавалася опроміненню; час опромінення становить 45-60 хв.

Зразки повторно спектрофотометрують при довжині хвилі 328 нм. Вміст вітаміну А визначають за різницею значень екстинкції (оптичної густини) з урахуванням коефіцієнта (фактора) 637, розрахованого Бессі для вітаміну А.

Розрахунок проводиться за формулою:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Де X – вміст вітаміну А, мкг/дл; 637 – коефіцієнт, розрахований за Бессі для визначення вітаміну А; E328(1) – оптична густина розчину до опромінення; E328(2) – оптична густина розчину після опромінення.

Коефіцієнт перерахунку концентрації вітаміну А з мкг/дл у мкмоль/л становить 0,035.

Вміст каротиноїдів розраховується за формулою:

X = 480-E480,

Де X – вміст каротиноїдів, мкг/дл; 480 – коефіцієнт, розрахований за Бессі для визначення каротиноїдів; E480 – оптична густина досліджуваного розчину.

Примітка

За Бессі, при проведенні досліджень можна використовувати більший або менший об'єм сироватки, але її співвідношення до об'єму спиртового розчину має бути постійним при будь-якій зміні об'єму (кількості) ксилол-октанової суміші.

Нормальний вміст вітаміну А в сироватці крові становить: у новонароджених та немовлят – 160-270 мкг/л; у дорослих – 1,05-2,45 мкмоль/л (300-700 мкг/л). Вміст каротиноїдів у сироватці крові дорослих становить 800-2300 мкг/л.