Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) в діагностиці інфекційних захворювань
Останній перегляд: 23.04.2024
Весь контент iLive перевіряється медичними експертами, щоб забезпечити максимально можливу точність і відповідність фактам.
У нас є строгі правила щодо вибору джерел інформації та ми посилаємося тільки на авторитетні сайти, академічні дослідницькі інститути і, по можливості, доведені медичні дослідження. Зверніть увагу, що цифри в дужках ([1], [2] і т. д.) є інтерактивними посиланнями на такі дослідження.
Якщо ви вважаєте, що який-небудь з наших матеріалів є неточним, застарілим або іншим чином сумнівним, виберіть його і натисніть Ctrl + Enter.
ПЛР - один з методів ДНК-діагностики, що дозволяє збільшити кількість копій детектируемого ділянки геному (ДНК) бактерій або вірусів в мільйони разів з використанням ферменту ДНК-полімерази. Тестований специфічний для даного генома відрізок нуклеїнової кислоти багаторазово множиться (амплифицируют), що дозволяє його ідентифікувати. Спочатку молекула ДНК бактерій або вірусів нагріванням розділяється на два ланцюги, потім в присутності синтезованих ДНК-праймерів (послідовність нуклеотидів специфічна для визначається генома) відбувається зв'язування їх з комплементарними ділянками ДНК, синтезується другий ланцюг нуклеїнової кислоти слідом за кожним праймером в присутності термостабільної ДНК-полімерази . Виходить дві молекули ДНК. Процес багаторазово повторюється. Для діагностики досить однієї молекули ДНК, тобто однієї бактерії або вірусної частинки. Введення в реакцію додаткового етапу - синтезу ДНК на молекулі РНК за допомогою ферменту зворотної транскриптази - дозволило тестувати РНК-віруси, наприклад вірус ВГС. ПЛР - триступеневий процес, що повторюється циклічно: денатурація, отжиг праймерів, синтез ДНК (полімеризація). Синтезоване кількість ДНК ідентифікують методом ІФА або електрофорезу.
В ПЛР можна використовувати різний біологічний матеріал - сироватку або плазму крові, зішкріб з уретри, біоптат, плевральну рідину, ліквор і т.д. В першу чергу ПЛР застосовують для діагностики інфекційних хвороб, таких як вірусний гепатит В, вірусний гепатит С, вірусний гепатит D, ЦМВ-інфекція, інфекційні захворювання, що передаються статевим шляхом (гонорея, мотлох-дійная, мікоплазменна, уреаплазменная інфекції), туберкульоз, ВІЛ -інфекція і т.д.
Перевага ПЛР в діагностиці інфекційних захворювань перед іншими методами досліджень полягає в наступному:
- збудник інфекції можна виявити в будь-який біологічної середовищі організму, в тому числі і матеріалі, одержуваному при біопсії;
- можлива діагностика інфекційних хвороб на ранніх стадіях захворювання;
- можлива кількісна оцінка результатів досліджень (скільки вірусів або бактерій міститься в досліджуваному матеріалі);
- висока чутливість методу; наприклад, чутливість ПЛР для виявлення ДНК вірусу вірусного гепатиту В в крові становить 0,001 пг / мл (приблизно 4 × 10 2 копій / мл), в той час як чутливість методу гібридизації ДНК з використанням розгалужених зондів - 2,1 пг / мл (приблизно 7 × 10 5 копій / мл).
[