Аналіз крові на вірус Епштейна-Барра на антитіла і ПЛР: як правильно здавати, норма

Під герпесом ми звикли розуміти непривабливі болючі пухирчасті висипання на обличчі в області губ, які згодом утворюють коричневі скоринки. На жаль, це лише одна з граней вірусу герпесу, який може зустрічатися у людини у 8 формах. Те, що ми зазвичай називаємо герпесом, – це вірус 1 типу, або вірус простого герпесу. Вірус 2 типу викликає генітальний герпес, 3 типу – «вітрянку» та оперізуючий лишай, 4 типу – інфекційний мононуклеоз та кілька інших досить небезпечних патологій тощо. Цей список можна продовжувати далі, але ми зосередимося на вірусі герпесу 4 типу, який інакше називають вірусом Епштейна-Барр. Спробуємо розібратися, що таке вірус герпесу 4 типу, чим він небезпечний, коли і навіщо проводиться аналіз на вірус Епштейна-Барр, і що показують результати лабораторних досліджень.

Що таке вірус герпесу 4 типу?

Герпесвірус 4 типу, як один з різновидів герпесвірусної інфекції, був описаний 53 роки тому англійським вірусологом Майклом Епштейном. У роботі над проектом професору допомагала його аспірантка Івонн Барр. Саме цим людям вірус завдячує своєю назвою. Однак, через 15 років після відкриття вірусу його наукову назву змінили на людський герпесвірус 4 типу, а рік тому вірус назвали людським гаммавірусом 4 типу.

Але що таке вірус Епштейна-Барр? Як і будь-який інший вірус, віріон (вірусна частинка) герпесвірусу 4 типу складається з генетичного матеріалу (в даному випадку дволанцюгової ДНК) та навколишньої білкової оболонки (капсиду). Крім того, вірус оточений мембраною, яка допомагає йому легко проникати в клітини хазяїна.

Будь-який вірус – це неклітинна форма, яка є інфекційним фактором і не може розвиватися та розмножуватися поза клітинами живого організму. Улюбленим середовищем існування вірусу герпесу 4 типу вважаються епітеліальні клітини носоглотки. Не гребують вони й лейкоцитами, віддаючи перевагу одному з їх різновидів, який називається B-лімфоцитами. Саме B-клітини беруть активну участь у забезпеченні імунного захисту організму. При контакті з антигеном, яким у нашому випадку є вірус герпесу 4 типу (а точніше його антигени), B-лімфоцити виробляють антитіла (імуноглобулінні білки). Їх можна виявити в крові пацієнта, провівши аналіз на вірус Епштейна-Барр (ВЕБ).

Вірус герпесу 4 типу має 4 антигени, які з'являються в суворо визначеній послідовності:

• ЕА – це ранній антиген, який з'являється на початковій стадії захворювання, коли вірусні частинки знаходяться на стадії синтезу (первинна гостра інфекція або реактивація латентного вірусу при зниженні імунітету),
• VCA – це капсидний антиген, який міститься в білковій оболонці та також належить до ранніх, оскільки клінічно захворювання може навіть не проявлятися в цей період,
• MA – мембранний антиген, з'являється, коли віріон вже сформований,
• EBNA – ядерний (поліпептидний або ядерний) антиген – один із пізніх антигенів, антитіла до якого можуть бути виявлені навіть через кілька місяців після захворювання та залишаються в крові протягом усього життя.

Вірус герпесу 4 типу дуже підступний. Оскільки вірус неактивний поза живим організмом, заразитися ним можна лише від людини, яка є джерелом інфекції. І зовсім не обов'язково, щоб у нього чи неї проявлялися всі симптоми захворювання; інфекція може бути латентною, замаскованою під звичайну втому. Наприклад, синдром хронічної втоми в більшості випадків пов'язаний з вірусом Епштейна-Барр.

Окремі віріони можна знайти в крові, слині, спермі, вагінальних виділеннях та тканинах різних органів. Вірусні частинки разом зі слиною та кров’ю можуть потрапляти в навколишні нас предмети, де вони залишатимуться неактивними, поки якимось чином не потраплять в організм людини. У переважній більшості випадків зараження відбувається повітряно-крапельним шляхом або контактом (через поцілунки). Але можливі також внутрішньоутробна передача вірусу від матері до плоду, зараження під час переливання крові (якщо донорська кров містила віріони вірусу) та статевий контакт.

Після потрапляння в організм та проникнення в клітинні структури може пройти від 5 до 50 днів, перш ніж хвороба дасть про себе знати. Але вона може і не дати про себе знати, протікаючи в латентній формі, як це буває в більшості випадків.

Так, згідно з дослідженнями, близько 90% дорослого населення хоча б раз у житті перехворіло на герпетичну інфекцію, пов’язану з вірусом Епштейна-Барр. Більшість людей навіть не знають про це, оскільки їхній організм здатний боротися з вірусною атакою. Але це не завжди так.

Як проявляється вірус Епштейна-Барр?

Найчастіше лікарям у своїй практиці доводиться мати справу з такими видами герпесвірусної інфекції 4 типу:

• Хронічна форма (виникає після гострої фази захворювання, має деякі загальні симптоми поганого самопочуття),
• Латентна або прихована форма (симптоми відсутні, але вірус залишається активним і виділяється в навколишнє середовище),
• Повільна форма (зустрічається рідше, симптоми виникають по одному протягом тривалого періоду, що закінчується смертю пацієнта).

Люди вперше інфікуються вірусом Епштейна-Барр, переважно в дитинстві та підлітковому віці. Пік захворюваності припадає на вік від 14 до 18 років.

Первинна вірусна інфекція має 3 різні форми:

• безсимптомний (без клінічних проявів),
• респіраторні (симптоми респіраторної інфекції: лихоманка, виділення з носа, загальна слабкість тощо),
• Інфекційний мононуклеоз з тріадою основних симптомів: висока температура, ознаки болю в горлі з жовтуватими скоринками на мигдаликах, збільшення таких органів, як печінка та селезінка; спостерігається підвищення рівня лейкоцитів та збільшення лімфатичних вузлів.

Існує кілька варіантів виходу з гострої фази захворювання:

• повне одужання,
• симптоми захворювання зникають, але вірус залишається в організмі та розвивається, хоча вже не призводить до помітних змін у клітинах (стан носійства),
• симптоми захворювання відсутні, вірус не залишає організм, але також проявляє незначну активність (латентна форма),
• реактивація вірусу з латентної форми,
• хронічний перебіг інфекції (з рецидивами захворювання, хронічна активна форма, генералізований з ураженням органів та систем організму).

Результатом тривалого перебування вірусу в організмі може бути:

• Хронічна форма інфекційного мононуклеозу.
• Гематофагоцитарний синдром: стабільна лихоманка, зниження компонентів крові (підвищена згортання), збільшення печінки та селезінки, кровотеча слизових оболонок, жовтяниця (внаслідок порушення функції печінки), збільшення лімфатичних вузлів, неврологічні симптоми.
• Латентна форма з розвитком вторинного імунодефіциту: гіпертермія протягом тривалого періоду часу, загальна слабкість, збільшення та болючість лімфатичних вузлів, біль у м'язах та суглобах, часті інфекційні захворювання.
• Розвиток аутоімунних патологій у вигляді червоного вовчака, ревматоїдного артриту тощо.
• Прояви синдрому хронічної втоми з погіршенням загального самопочуття та працездатності.
• Генералізована форма хронічної інфекції з ураженням центральної нервової системи, серцевого міокарда, нирок, печінки та легень.
• Розвиток онкологічних захворювань (лімфолейкоз та лімфоми), при яких спостерігається патологічне збільшення кількості клітин лімфатичної системи. Вірус герпесу 4 типу не знищує клітини-носії, а змушує їх активно розмножуватися, внаслідок чого виявляються новоутворення з лімфоїдної тканини.

Як бачимо, вірус Епштейна-Барр не такий нешкідливий, як здається на перший погляд, а це означає, що не варто ставитися до нього легковажно. Більше того, вірус герпесу 4 типу характеризується частими епізодами вірусоносійства та латентною формою, не кажучи вже про різні форми хронічної інфекції, коли людина залишається джерелом інфекції, навіть не підозрюючи про це.

У цьому випадку наявність інфекційного агента в організмі можна визначити лише за допомогою спеціального аналізу на вірус Епштейна-Барр, біоматеріалом для якого зазвичай є кров.

Показання аналізу на вірус Епштейна-Барра

Оскільки герпесвірусну інфекцію 4 типу іноді не так легко виявити, її не завжди підозрюють. Але є певні ознаки, за якими лікар може запідозрити наявність вірусу в організмі:

• сильно ослаблена імунна система (у групі ризику пацієнти з ВІЛ-інфекцією та СНІДом, пацієнти після трансплантації органів або хіміотерапії),
• збільшення регіональних лімфатичних вузлів у підборідді та потиличній ділянці голови та їх болючість, особливо якщо це спостерігається після переливання крові або трансплантації органів від донора.
• гостра респіраторна вірусна інфекція (ГРВІ), що протікає на тлі дуже високих температур (38-40 градусів),
• поява ознак інфекційного мононуклеозу, який найчастіше виникає під впливом вірусу Епштейна-Барр.

Навіть якщо у людини немає вищезгаданих симптомів, фахівець може запідозрити щось на кшталт деяких результатів рутинних аналізів (загальний аналіз крові та біохімія), а також досліджень імунного статусу.

Загальний аналіз крові на вірус Епштейна-Барр може показати:

• збільшення кількості лімфоцитів,
• низький рівень гемоглобіну, що свідчить про зниження рівня еритроцитів,
• підвищена згортання крові через велику кількість тромбоцитів,
• поява віроцитів (атипових лімфоцитів, подібних за будовою до моноцитів).

Біохімічний аналіз крові, який надає інформацію про стан внутрішніх органів, покаже зміни у функціонуванні печінки та селезінки.

Імуноферментний аналіз на вірус Епштейна-Барр може показати зміну кількості специфічних лімфоцитів, розбіжність у кількості імуноглобулінів різних класів (дизимуноглобулінемія) та дефіцит імуноглобуліну G, що свідчить про слабку імунну систему та її нездатність стримувати натиск вірусу.

Такі результати неспецифічних аналізів можуть насторожити лікарів, але точно сказати, з чим вони мають справу, поки що неможливо. Все залишиться на стадії припущень та попереднього діагнозу. У більшості випадків лікарі підозрюють латентну форму інфекційного мононуклеозу, хоча інші вірусні патології (грип, гепатит тощо) можуть проявлятися так само.

Через високу поширеність гепатиту 4 типу та можливість його передачі від матері до дитини, тест на вірус Епштейна-Барр також буде корисним під час планування вагітності. Якщо мати раніше перенесла цю інфекцію, її організм виробив до неї антитіла. Повторне зараження зазвичай виключається завдяки формуванню міцного імунітету, а якщо воно все ж таки відбудеться, то вже не матиме наслідків, які можливі при першій зустрічі з вірусом. Імунітет стримуватиме активність вірусу протягом усього життя, хоча сам вірус залишатиметься всередині організму, як і будь-який з герпесвірусів.

Якщо майбутня мама заразиться вірусом герпесу під час вагітності, це може призвести до викиднів та передчасних пологів, або ж вірус негативно вплине на внутрішньоутробний розвиток дитини.

Онколог може призначити тест на вірус Епштейна-Барр, якщо є підозра на лімфому Беркетта або для діагностики пухлинних процесів у людей з ВІЛ. Терапевт може використовувати цей тест для діагностики герпетичних інфекцій (диференціальна діагностика для визначення типу вірусу). Іноді тест також використовується для оцінки ефективності лікування.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Підготовка

Залежно від виду дослідження, біоматеріалом для нього може бути кров, слина, сеча, мокротиння, зразок навколоплідних вод, зішкріб, взятий з цервікального каналу або уретри, спинномозкова рідина (ліквор). Найчастіше лікарі вдаються до аналізу крові, який вважається найбільш інформативним.

Зрозуміло, що деякі фактори можуть негативно вплинути на якість і кількість біоматеріалу, тому варто дотримуватися певних правил напередодні:

• Будь-які аналізи (особливо аналізи крові) рекомендується здавати вранці натщесерце. Останній прийом їжі має бути не пізніше ніж за 12 годин до забору крові, тому краще випити воду на вечерю.
• Найбільш прийнятним матеріалом для аналізу вірусу Епштейна-Барр вважається венозна кров, і перед здачею крові з вени завжди рекомендується 15-хвилинний відпочинок, якщо людина щойно прибула до лабораторії,
• Щоб забір крові пройшов без наслідків, а результати аналізу були достовірними, не рекомендується виконувати активну фізичну роботу або займатися спортом, вживати алкогольні напої та палити протягом 12 годин до процедури.
• На результати аналізів також можуть вплинути ліки, які ви приймаєте. Вам слід припинити прийом ліків щонайменше за 2 дні до аналізу. Якщо це неможливо, ви повинні повідомити медсестру лаборантки про ліки, які ви приймаєте.
• Під час вагітності, перед тестуванням на ВЕБ, проводиться тест на токсоплазмоз, щоб виключити хибнопозитивну реакцію.
• Якщо аналіз крові на вірус Епштейна-Барр робиться дитині віком до 5 років, за півгодини до процедури дитині слід дати випити багато кип'яченої води відносно невеликими порціями.

Якщо на аналіз береться інший біоматеріал, потрібно заздалегідь уточнити у лікаря всі нюанси підготовки до аналізу залежно від використаного матеріалу.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ]

Техніка аналізу на вірус Епштейна-Барра

Важливу роль у діагностиці герпесу 4 типу та інфекційного мононуклеозу лікарі відводять специфічним тестам, які допомагають ідентифікувати ДНК вірусу або унікальні антитіла в біоматеріалі пацієнта. До основних видів лабораторних досліджень, що використовуються для виявлення вірусу Епштейна-Барр в організмі людини, належать імуноферментний аналіз (ІФА) та ПЛР-діагностика. Давайте детальніше розглянемо суть обох методів та особливості їх проведення.

Імуноферментний аналіз на вірус Вептану Ветхин-Барр

ІФА – це дослідження (аналіз) венозної крові пацієнтів на наявність антитіл до вірусу Епштейна-Барр. В результаті діагностики в крові пацієнтів з ВЕБ виявляються імуноглобуліни типу IgG або IgM (всього їх 5 типів) до одного з 3 антигенів вірусу (раннього, капсидного або ядерного).

Аналіз проводиться в імунологічній лабораторії, де з вени пацієнта береться близько 10 мл крові. Потім біоматеріал залишають при кімнатній температурі на чверть години, протягом яких кров згортається. Згусток ретельно відокремлюють від рідкої частини. Рідину центрифугують і отримують чисту сироватку крові. Саме вона піддається подальшому дослідженню.

Ідея методу виникла на основі даних про те, що наш організм виробляє специфічні антитіла до кожного типу вірусів та бактерій, які проникають в організм ззовні. Організм розпізнає їх як чужорідні та знищує за допомогою унікальних антитіл, які міцно прикріплюються до антигену.

Суть ІФА-аналізу базується на цій реакції. Антитіла з прикріпленими до них мітками з'єднуються з антигенами. На мітки наноситься речовина, яка змінює колір зразка при реакції зі спеціальним ферментом. Чим більше таких «ланцюжків», тим інтенсивніший колір біоматеріалу.

Імуноферментний аналіз можна проводити трьома методами:

• Прямий ІФА. Тестову рідину поміщають у лунки та залишають приблизно на півгодини, щоб антигени могли прикріпитися до стінок лунок. До сорбованих антигенів додають рідину з міченими антитілами. Через необхідний час (від півгодини до 5 годин), коли антитіла виявляться та зв'яжуться з антигенами, рідину зливають, лунки ретельно промивають та додають до них фермент. Концентрацію вірусу в одиниці крові визначають методом забарвлення.
• Непрямий ІФА. За цього методу до антигенів, сорбованих на поверхні лунок, додають тестовану сироватку крові та мічені антитіла. В результаті отримують 2 типи зв'язок, деякі з яких мічені. Результат залежить від концентрації антигенів у досліджуваному зразку. Чим більше немічених антитіл, тим менше сполук, мічених ферментом.

Далі до промитого складу додають спеціальний реагент, який використовується для визначення ферментативної активності комплексів антиген-антитіло.

• «Сендвіч». Відрізняється від непрямого методу тим, що спочатку на поверхні сорбуються не антигени, а антитіла. До них додається розчин, що містить досліджувані антигени. Після промивання носія додаються антитіла з ферментативними мітками. Надлишок антитіл знову видаляють і за допомогою перекису водню отримують забарвлену речовину, яку досліджують спектрометричним методом.

Цей вид аналізу дозволяє не тільки виявити специфічні антитіла та визначити концентрацію антигенів, але й уточнити стадію захворювання. Річ у тім, що різні антигени вірусу Епштейна-Барр з'являються на різних стадіях герпетичної інфекції, а це означає, що антитіла до них виробляються в певний період захворювання.

Так, антитіла IgG до раннього антигену (IgG EA) з'являються в крові через 1-2 тижні після зараження, коли захворювання знаходиться в гострій стадії або стадії реактивації вірусу. Імуноглобуліни цього типу зникають через 3-6 місяців. При хронічному перебігу вірусної інфекції таких антитіл особливо багато, а при атиповій формі вони взагалі відсутні.

Антитіла IgG до капсидного антигену (IgG VCA) також з'являються рано, протягом перших 4 тижнів захворювання, але найбільша їх кількість визначається до другого місяця інфекції. У гострій фазі вони виявляються у більшості пацієнтів, але можуть не проявлятися у дітей. При хронічному перебігу захворювання, особливо в періоди реактивації вірусу, кількість IgG VCA особливо висока. Ці антитіла залишаються в крові людини назавжди, як і сам вірус, що свідчить про сформований імунітет до інфекційного агента.

Антитіла IgM до капсидного антигену (IgM VCA) можуть з'явитися ще до перших ознак захворювання. Їх концентрація (титри) особливо висока в перші 6 тижнів захворювання. Цей тип антитіл характерний як для гострої інфекції, так і для реактивації хронічної інфекції. IgM VCA зникають через 1-6 місяців.

Антитіла IgG до ядерного гена (IgG EBNA) можуть свідчити про те, що людина раніше безпосередньо стикалася з герпетичною інфекцією. У гострій фазі захворювання вони виявляються вкрай рідко, зазвичай з'являються в період одужання (на 3-10-му місяці). Їх можна виявити в крові через кілька років після зараження.

Виявлення окремих антигенів не дає повної картини захворювання, тому тести на різні антитіла слід проводити разом. Наприклад, якщо присутній лише IgM VCA, а IgG EBNA не виявлено, це первинна інфекція.

На жаль, імуноферментного аналізу часто недостатньо для виявлення первинної герпетичної інфекції або вродженої патології. В останньому випадку антитіла можуть взагалі не виявлятися. Як підтверджувальний тест на первинне захворювання використовується молекулярне дослідження крові або іншого біологічного матеріалу на вірус Епштейна-Барр.

Аналіз PRC на вірус Епштейна-Барр

Цей аналіз проводиться на стадії гострої первинної інфекції, інакше його результат буде невірним.

Суть методу ПЛР (полівимірної ланцюгової реакції) полягає в тому, що кожен інфекційний агент має свій власний набір генів, що містяться в молекулі ДНК. ДНК збудника міститься в біоматеріалі, взятому для дослідження, в невеликих кількостях (самі віруси мають мікроскопічні розміри), тому оцінити ситуацію дуже складно. Але якщо провести специфічну реакцію, кількість генетичного матеріалу значно збільшиться, що дозволить назвати збудника.

За допомогою одноразових інструментів береться матеріал для молекулярного дослідження, який поміщається в спеціальний пристрій для аналізу. Пристрій являє собою термостат зі спеціальною програмою – термоциклером або підсилювачем. Пристрій виконує повний цикл PRC кілька десятків разів (близько 2-3 хвилин), який має 3 етапи:

• Денатурація (при температурі 95 градусів відбувається розділення ланцюгів ДНК).
• Відпал (при температурі 75 градусів у досліджуваний матеріал вводяться спеціально підготовлені «праймери» для EBV, які прикріплюються до ДНК вірусу).
• Розширення або розмноження генетичного матеріалу (до насіння при температурі 72 градуси додається спеціальний фермент, який відтворює новий ланцюг ДНК, тим самим подвоюючи кількість генетичного матеріалу).

Якщо повний цикл полівимірної реакції виконати 50 разів, кількість матеріалу збільшиться в 100 разів. Це означає, що ідентифікувати збудника буде набагато легше.

Тест на вірус Епштейна-Барр у дитини

Як ми вже знаємо, вірус Епштейна-Барр може спричиняти розвиток багатьох захворювань. Потрапивши в організм людини, він залишається його постійним мешканцем, і лише злагоджена робота імунної системи не дозволяє йому активно паразитувати всередині клітин.

Майже 95% дорослого населення світу живе з ВЕБ всередині, і більшість із них познайомилися з вірусом у ранньому дитинстві. Дехто успадкував його від матері, інші ж отримали вірус від батьків та родичів, які кинулися до дитини з поцілунками, або повітряно-крапельним шляхом у дитячому садку чи школі (інфекційні захворювання там зазвичай набувають «вселенських» масштабів).

Маленькі діти взагалі схильні тягнути все до рота, а найбільша кількість віріонів міститься в слині. А якщо кілька дітей облизують одну й ту саму іграшку в дитячому садку, поки вихователі зайняті своїми справами, то не дивно, що вірус так активно поширюється у великих дитячих групах.

ВЕБ можна сміливо назвати хворобою дітей та молоді, адже до підліткового віку половина дітей вже мають вірус в організмі (а до 30 років – близько 90% дорослих). Діти різного віку хворіють по-своєму. До року, поки дитина активно не спілкується з людьми, ймовірність того, що вона захворіє, невелика. Дитина старше року, навіть якщо вона не ходила до дитячого садка, стає більш товариською, грається з однолітками на вулиці, активно ходить по магазинах з мамою тощо, і ймовірність підхопити вірус стає набагато вищою.

Але це не привід замикати дитину в 4 стінах. У віці 1-3 років хвороба в переважній більшості випадків протікає без жодних симптомів, хіба що з незначним підвищенням температури та легким нежитем, що нагадує застуду. Виявляється, що чим раніше дитина знайомиться з вірусом, тим легше протікає таке знайомство.

Недобре, якщо дитина захворіє без появи в крові антитіл IgG VCA, що може свідчити про те, що імунітет до вірусу не сформувався, і реактивація вірусу можлива, як тільки імунна система ослабне. Причина, найімовірніше, полягає в недосконалості імунної системи маленьких дітей, яка перебуває в процесі формування протягом кількох років.

Шкільне життя створює ще більше передумов для захворювання, особливо в підлітковому віці, коли молоді люди активно практикують поцілунки. Але у дітей старше 3 років захворювання рідше протікає безсимптомно. У більшості випадків лікарі стикаються з інфекційним мононуклеозом з його характерними симптомами.

Незважаючи на те, що патологія може мати тривалий перебіг (близько 2 місяців), вона не така небезпечна і не вимагає застосування серйозних ліків. Лікарі призначають протизапальні та противірусні препарати, якщо приєднується бактеріальна інфекція, звертаються за допомогою до антибіотиків. До речі, пеніциліни в цьому випадку не рекомендуються через те, що вони можуть спровокувати появу шкірного висипу.

Не варто думати, що якщо дитина або підліток захворів на інфекційний мононуклеоз, це означає, що в їхньому організмі оселився вірус Епштейна-Барр. У цієї хвороби є й інші, менш поширені збудники, такі як цитомегаловірус (вірус герпесу 5 типу). Щоб зрозуміти, з чим вони мають справу, лікарі призначають аналіз на вірус Епштейна-Барр та, за необхідності, інші лабораторні дослідження.

Також правда, що інфекційний мононуклеоз — не єдиний прояв вірусу Епштейна-Барр у дитячому віці. Існують й інші захворювання, пов’язані з цим збудником, але в нашому регіоні вони трапляються рідко.

Так, лімфома Беркітта (саме їй ВЕБ завдячує своїм виявленням) зустрічається переважно у дітей в африканських країнах, дуже рідко в Америці, і ще рідше в Європі (і то лише на тлі СНІДу). Пухлина щелепи з ураженням лімфатичних вузлів, нирок та інших органів виявляється у дітей віком 3-8 років.

Рак носоглотки, значна частка інших лімфом, волохата лейкоплакія рота – все це прояви ВЕБ на тлі сильно зниженого імунітету, що виникає при ВІЛ-інфекції та її пізній стадії СНІДу.

Вроджений імунодефіцит та приєднання вірусу Епштейна-Барр – небезпечна суміш, яка може призвести до розвитку проліферативного синдрому у дитини. У цьому випадку збільшення кількості В-лімфоцитів призводить до появи гранул у багатьох органах, що заважає їм нормально функціонувати. Це захворювання з високим рівнем смертності, але воно розвивається не на тлі нормального імунітету.

Можна сказати, що в дитячому віці вірус Епштейна-Барр небезпечний переважно у випадках імунодефіциту через розвиток різних ускладнень. У більшості випадків все обмежується інфекційним мононуклеозом. І хоча він не потребує спеціального лікування, лікарі все ж таки воліють встановлювати природу збудника, для чого дитині призначають загальний аналіз крові, імуноферментний аналіз та ПЛР.

Оскільки в дитячому віці переважно відбувається первинне інфікування, цілком можна обмежитися лише загальним аналізом крові та ПЛР, що є досить інформативним при першому виявленні захворювання.

[ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ], [ 21 ], [ 22 ]

Норма

Результати ПЛР-аналізу обробляються за допомогою електрофорезу або з використанням мічених «праймерів». В останньому випадку достатньо просто додати реагент (хромоген) і за кольором визначити, чи є віріони у зразку. Позитивний результат електрофорезу вказується, коли в досліджуваному зразку виявляються нитки ДНК різної довжини.

Під час інкубаційного періоду захворювання та безсимптомного вірусоносійства ПЛР дасть негативний результат, як і у випадку абсолютної відсутності вірусу в організмі. На початку розвитку первинної інфекції та на її ранніх стадіях ПЛР у режимі реального часу може давати як позитивні, так і негативні результати, що жодним чином не прояснює ситуацію.

Однак, у розпал захворювання (гостра фаза), при його хронічному перебігу або реактивації вірусу (загострення) та у разі атипових форм, аналіз буде позитивним. Якщо людина хворіла тривалий час і вірус у її організмі знаходиться в неактивному стані, ПЛР-аналіз дасть негативний результат, тобто проведення цього аналізу в цей період також недоцільне, як і на занадто ранніх стадіях захворювання.

Треба сказати, що точні результати цього виду лабораторних досліджень можливі лише у випадку первинного інфікування та відсутності віріонів інших вірусів.

Тепер щодо імуноферментного аналізу на вірус Епштейна-Барр. До нього пред'являються ті ж вимоги. Наявність в організмі вірусу герпесу 5 або 6 типів, токсоплазмозу та ВІЛ-інфекції може спотворити результат не менше, ніж недбале ставлення до аналізу або низька якість використовуваних реагентів. У цьому випадку можуть знадобитися додаткові дослідження з урахуванням можливих збудників.

Нормальними результатами аналізів, які свідчать про відсутність вірусу в організмі, вважаються негативні результати за всіма 4 тестами: IgG EA, IgM VCA, IgG VCA та IgG EBNA. Так, кожен тест проводиться окремо, оскільки антигени з'являються в різні періоди захворювання. Іноді можуть бути призначені лише окремі тести, але в більшості випадків доводиться проводити всі 4 тести, але в різні періоди захворювання.

Наприклад, під час інкубаційного періоду захворювання, а також за відсутності інфекції, в крові не виявляється жоден з 4 типів антитіл. Такий результат не можна вважати достатнім, оскільки він не дозволяє диференціювати людину, яка вперше захворіла, від здорової.

На початку розвитку первинного захворювання в крові з'являються лише антитіла IgM до VCA. На ранніх стадіях захворювання до них приєднуються IgG до VCA.

Гостра стадія первинної інфекції протікає з утворенням трьох типів антитіл: IgG VCA, IgM VCA та IgG EA, причому найбільша кількість антитіл IgG виявляється до капсидного антигену. Такий самий склад антитіл зберігається протягом шести місяців після гострої фази захворювання, але кількість IgM VCA поступово зменшується до нуля.

Через шість місяців після захворювання в крові з'являються антитіла IgG до EBNA, тоді як імуноглобулінів IgG до EA стає все менше, а IgM до VCA взагалі відсутні.

У хронічних випадках захворювання або реактивації вірусу можуть бути різні показники. Найчастіше в крові виявляються всі 4 типи антитіл. Але цілком може бути, що імуноглобуліни IgM VCA та IgG EBNA не виявляються.

Ускладнення вірусної інфекції пухлинними процесами відбувається за відсутності антитіл IgM VCA, а імуноглобуліни IgG EBNA виявляються не у всіх випадках.

Але імуноферментний аналіз визначає не тільки наявність певних антитіл, але й їх концентрацію, що дозволяє з більшою точністю судити про стадію патології та її можливі наслідки. Тут не доводиться говорити про конкретні цифри. Адже кожна лабораторія проводить аналіз одним із можливих способів, використовуючи різні реактиви, тому результати аналізу різних лабораторій можуть відрізнятися в цифровому форматі.

Пацієнту обов'язково надають форму із зазначенням порогових (референтних) значень. Якщо результат нижче порогового значення, це вважається нормальним (негативним) показником. Якщо визначене число вище референтного значення, все вказує на позитивний результат, що означає проживання вірусу в організмі. Значення визначеного значення вказує на стадію захворювання та колонізацію організму віріонами EBV, тобто на тяжкість патології.

Якщо результат ІФА-тесту негативний, це означає лише те, що людина не мала контакту з вірусом Епштейна-Барр у минулому. Але неможливо з упевненістю сказати, чи присутній вірус на даний момент в організмі. Негативний результат може бути спричинений інкубацією збудника в організмі та безсимптомним вірусоносійством. Іноді, щоб переконатися, що організм не заселений вірусом, необхідно провести другу серію тестів через деякий час.

Якщо результат ІФА на вірус Епштейна-Барр лише незначно перевищує референтні значення, результат вважається сумнівним. Причиною найчастіше є рання стадія захворювання або наявність віріонів іншого вірусу в організмі. У цьому випадку через 2 тижні рекомендується зробити повторний тест на ВЕБ та, можливо, на інші збудники.

[ 23 ], [ 24 ], [ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]

Що стосується питання про те, скільки часу потрібно, щоб зробити тест на вірус Епштейна-Барр і коли можна очікувати результатів, то особливих труднощів очікувати не варто. У серйозній, добре обладнаній лабораторії доведеться чекати не більше 2 днів після здачі біоматеріалу. У ситуаціях, що вимагають термінового аналізу, відповідь можна отримати навіть через пару годин.

Тест на вірус Епштейна-Барр слід проводити в перевіреній лабораторії, де є і якісні реагенти, і кваліфіковані фахівці. Адже тест коштує грошей (і не малих, тест на один тип антитіл коштує близько 150-170 гривень), і не хотілося б отримати хибний результат, а потім, можливо, звернутися знову, але в іншу лабораторію, для повторного тесту.

[ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ]