Вірус гепатиту A

Вірусний гепатит А - інфекційна хвороба людини, що характеризується переважним ураженням печінки і клінічно інтоксикацією і жовтяницею. Вірус гепатиту А був виявлений в 1973 р С. Фейнстоном (і ін.) За допомогою методу імунної електронної мікроскопії і шляхом зараження мавп - шимпанзе і мармозеток. Суть методу імунної електронної мікроскопії полягає в тому, що до фільтрату випорожнень хворого на гепатит А додають специфічні антитіла (сироватку реконвалесцента) і осад піддають електронній мікроскопії. Завдяки взаємодії вірусів із специфічними антитілами вони піддаються специфічної агрегації. Їх в цьому випадку легше виявити, а агрегація під впливом антитіл підтверджує специфічність збудника. Відкриття С. Фейнстона було підтверджено в дослідах на добровольцях.

Вірус гепатиту А має сферичну форму, діаметр віріона - 27 нм. Геном представлений однонитевой позитивної РНК з м. М. 2,6 МД. Суперкапсид відсутня. Тип симетрії кубічний - ікосаедр. Капсид має 32 капсомеров, він утворений чотирма полипептидами (VP1-VP4). За своїми властивостями вірус гепатиту А віднеси до роду Heparnovirus, сімейству Picornaviridae. В антигенному відношенні вірус гепатиту A (HAV - hepatitis A virus) є однорідним. HAV добре розмножується в організмі шимпанзе, павіанів, гамадрилів і ігрункових мавп (мармозеток). Тривалий час вірус не вміли культивувати. Лише в 1980-х рр. Вдалося отримати культури клітин, в яких HAV розмножується. Спочатку для цих цілей використовували перещеплюваних лінії клітин нирки ембріона макака-резус (культура FRhK-4), а зараз - перевивали лінію клітин нирок зелених мавп (культура 4647).

Згідно з рекомендаціями експертів ВООЗ, прийнята наступна номенклатура маркерів вірусу гепатиту А: вірус гепатиту А - НАУ антитіла до вірусу гепатиту А: анти-наV IgМ і анти-наV IgG.

НаV є дрібні частинки діаметром 27-30 нм, що мають ікосаедральную симетрію і володіють гомогенність. На електронограмі, отриманої за допомогою методу імунної агрегації, виявляються електронно-щільні частинки з поверхнево розташованими симетрично укладеними капсомерами. При негативному контрастировании в препаратах виявляються як повні, так і порожні частки. Нуклеокапсид наV, на відміну від такого при грипі, не має поверхневих виступів і оболонки. Важливо також, що віріон наV не має серцеподібної структури.

За своїми фізико-хімічними властивостями вірус гепатиту А віднесений до сімейства вірусів, роду ентеровірусів з порядковим номером 72. Однак така таксономія виявилася занадто незвичною, і ВООЗ визнала можливим залишити термінологію «вірус гепатиту А».

Як і всі віруси сімейства Рicornaviridае, вірус гепатиту А містить рибонуклеїнової кислоту. У деяких лабораторіях показана можливість клонування генома вірусу гепатиту А, що відкриває перспективу отримання вакцинних препаратів.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Резистентність вірусу гепатиту А

Вірус відносно стійкий до високої температури, кислот, жірорастворітелей (відсутні ліпіди), дезінфікуючих засобів, добре переносить низьку температуру. Все це сприяє тривалому збереженню його у зовнішньому середовищі. При кімнатній температурі він виживає кілька тижнів, при 60 ° С частково втрачає інфекціозность через 4-12 год, повністю - через кілька хвилин при 85 ° С. Високорезістентен до хлору, завдяки чому здатний проникати в водопровідну воду через бар'єри водоочисних споруд.

Підсумовуючи всі дані, можна наступним чином охарактеризувати вірус гепатиту А:

• природний господар - людина;
• експериментальні тварини - мармозети, шимпанзе;
• джерело інфікування - фекалії;
• захворювання - епідемічно і ендемічної;
• шлях передачі - фекально-оральний;
• інкубаційний період - 14-40 діб;
• перехід в хронічний гепатит - не відзначається.

Імунологічні властивості наV такі:

• Прототііние штами - Ms-l, СR-326, GВG. Все імунологічно подібні або ідентичні;
• Антитіла - IgМ і IgG, продукуються у відповідь на введення структурних білків вірусу і протективний;
• I Тротектівное дію людського сироваткового у-глобуліну - оберігає або аттенуірует захворювання за умови введення до зараження або протягом інкубаційного періоду.

Фізико-хімічна характеристика НАУ наступна:

• Морфологія - безоболочечная сферична частинка з кубічної симетрією, капсид складається з 32 капсомеров;
• Діаметр - 27-30 нм;
• Щільність в СsС1 (г / см3) - 1,38-1,46 (відкриті частки), 1,33-1,34 (зрілий віріон), 1,29-1,31 (незрілі віріони, порожні частки);
• Коефіцієнт седиментації - 156-160 зрілих віріонів;
• Нуклеїнова кислота - однониткових, лінійна РНК;
• Відносна молекулярна маса - 2,25 106-2,8 106КД;
• Число нуклеотидів - 6,500-8,100.

Стабільність наV при фізико-хімічних впливах наступна:

• Хлороформ, ефір - стабільний;
• Хлор, 0,5-1,5 мг / л, 5 ° С, 15 хв - часткова інактивація;
• Хлорамін, 1 г / л, 20 ° С., 15 хв - повна інактивація;
• Формалін, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 ч - повна інактивація, 1: 350, 20 ° С, 60 хв - часткова інактивація.

Температура:

• 20-70 ° С - стабільний;
• 56 ° С, 30 хв - стабільний;
• 60 ° С, 12 ч - часткова інактивація;
• 85 ° С, 1 хв - повна інактивація;
• Автоклавирование, 120 ° С. 20 хв - повна інактивація;
• Сухий жар, 180 ° С, 1ч - повна інактивація;
• УФО, 1,1 Вт, 1 хв - повна інактивація.

Представлені дані показують, що за своїми фізико-хімічними властивостями вірус гепатиту А найближче стоїть до ентеровірусів. Подібно до інших ентеровірусів, HAV стійкий до дії багатьох дезінфікуючих розчинів, повністю інактивується протягом кількох хвилин при 85 ° С і автоклавуванні.

Доведено, що вірус гепатиту А може репродукуватися в первинних і перещеплюваних моношарових лініях культур клітин людини і мавп. Особливо активна репродукція вірусу гепатиту А в культурах in vitro спостерігається при використанні в якості вихідного матеріалу екстрактів печінки хворих мавп. Слід, однак, відзначити, що у всіх дослідах по репродукції вірусу гепатиту А на культурах in vitro звертає на себе увагу тривалий інкубаційний період при первинних пасажах (до 4 -10 тижнів), в подальшому накопичення вірусного генетичного матеріалу наростає, але абсолютні величини залишаються вельми незначними, що дає підставу багатьом дослідникам говорити про неповну реплікації вірусу гепатиту А в тканинних культурах.

Резюмуючи дані літератури по репродукції вірусу гепатиту А внетканевих культурах, можна сказати, що факт тривалого переживання HAV in vitro не підлягає сумніву. Оптимальні умови для стабільного високого рівня реплікації вірусу остаточно не виявлені, а це стримує вивчення його біологічних властивостей, отримання джерела реагентів для виробництва діагностику адов і конструювання вакцин.

Разом з тим в літературі можна знайти і більш оптимістичні судження про дану проблему. Вирішення всіх питань, пов'язаних з культивуванням вірусу гепатиту А, - справа найближчого майбутнього. При вивченні оптимальних умов розмноження HAV в культурі клітин нирки ембріона макаки-резус виявлені дві фази: фаза продукції інфекційного вірусу (до 6-8 діб на рівні 5-го пасажу) і фаза інтенсивного накопичення вірусного антигену. Показано також, що найбільш істотне накопичення вірусного антигену відбувається в умовах так званого роллерного культивування (обертові флакони). Цей шлях відкриває широкі можливості отримання культурального антигену в великих кількостях, а отже, з'явиться вихідний матеріал для приготування діагностичних систем і виготовлення вакцинальних препаратів.

Епідеміологія гепатиту А

Вірус гепатиту А має високу патогенностью для людини. За висновком ВООЗ (1987 р), для виникнення хвороби досить зараження всього одним вирионом. Однак практична заражає доза, ймовірно, значно вище. Джерелом інфекції є тільки інфікована людина. Вірус виділяється у великій кількості з випорожненнями за 12-14 днів до появи жовтяниці і протягом 3 тижнів. Жовтяничного періоду. Істотних відмінностей у виділенні збудника у хворих жовтяничними, безжовтяничними і безсимптомними формами гепатиту А не виявлено. Спосіб зараження - фекально-оральний, головним чином водний, а також побутовим і харчовим шляхом. Спосіб зараження - фекально-оральний, головним чином водний, а також побутовим і харчовим шляхом. Основний (первинний) шлях передачі вірусу - водний. Можливо також зараження повітряно-крапельним шляхом. Сприйнятливість населення загальна. Хворіють переважно діти у віці до 14 років. Хвороба має виражену осінньо-зимову сезонність.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Симптоми гепатиту А

Інкубаційний період варіює від 15 до 50 днів, що залежить від величини заражающей дози вірусу, але в середньому становить 28-30 днів. Потрапивши в організм, вірус гепатиту А розмножується в регіонарних лімфатичних вузлах, проникає в кров, а потім в клітини печінки і викликає гострий дифузний гепатит, який супроводжується ураженням гепатоцитів і ретикулоендотеліальних елементів печінки і зниженням її дезінтоксикаційної і бар'єрної функцій. Пошкодження гепатоцитів виникає не за рахунок прямої дії вірусу, а в результаті імунопатологічних механізмів. Найбільш типовою картиною гепатиту А є гостра жовтянична циклічна форма: інкубаційний період, продромальний (переджовтяничний), жовтяничний період і реконвалесценция. Однак в осередках інфекції виявляється велика кількість хворих з безжовтяничними і безсимптомними формами інфекції, число яких значно переважає над жовтяничними ( "феномен айсберга").

Постінфекційний імунітет міцний і тривалий, обумовлений вируснейтрализующие антитілами і клітинами імунної пам'яті.

Лабораторна діагностика гепатиту А

Діагностика гепатиту А (крім зараження тварин - шимпанзе, мармозет, павіанів, яких у нас немає) заснована на різних імунологічних методах: РСК, імунофлуоресцентний метод, гемагглютинация імунного прилипання (комплекс вірусний антиген + антитіло в присутності комплементу адсорбується на еритроцитах і викликає їх склеювання) . Однак можливості застосування цих методів обмежені через відсутність специфічних вірусних антигенів, а реакція імунофлуоресценції вимагає біоптатів печінки, що небажано. Надійним і специфічним є метод імунної електронної мікроскопії, проте він дуже трудомісткий. Тому поки єдиною прийнятною імунологічної реакцією є метод іммуносорбентний аналізу твердої фази в вигляді ІФМ або РИМ, особливо в модифікації "захоплення" імуноглобулінів класу М. В нашій країні для цієї мети запропонована тест-система - "диагн-А-ГЕП". Принцип роботи цієї тест-системи наступний. На стінках полістиролів луночек сорбируются спочатку антитіла до імуноглобулінів класу М (антііммуноглобуліни М), потім додається досліджувана сироватка хворого. Якщо в ній є антитіла класу IgM, вони будуть зв'язуватися ан-ти-антитілами М, потім додається специфічний вірусний антиген (вірус гепатиту А), який отримують шляхом вирощування в культурі клітин. Система промивається, і до неї додаються противірусні антитіла, мічені пероксидазою хрону. Якщо сталося взаємодія всіх чотирьох компонентів системи, виникає чотирьохшаровий "сендвіч":

• антііммуноглобуліни М,
• імуноглобуліни М (проти вірусу гепатиту А - в досліджуваній сироватці хворого),
• вірусний антиген,
• антивірусні антитіла, мічені ферментом.

Для виявлення цього комплексу в ямочки додають субстрат для ферменту. Під впливом ферменту він руйнується, і утворюється забарвлений продукт. Інтенсивність забарвлення можна виміряти кількісно за допомогою спектрофотометра або фотоколориметр.

Перевага методу "захоплення" IgM полягає в тому, що антитіла цього класу імуноглобулінів з'являються при первинному імунній відповіді і свідчать про активну стадії інфекції, вони зникають після перенесеного захворювання. Противірусні антитіла, що відносяться до класу IgG, навпаки, тривалий час зберігаються після перенесеного захворювання, забезпечуючи набутий імунітет. Для виявлення вірусу гепатиту А запропонований метод ДНК-зонда: використовують в якості зонда ДНК комплементарную вРНК.

Лікування гепатиту А

У зв'язку з тим що при вірусних гепатитах порушена продукція інтерферонів, лікування гепатиту А засноване на застосуванні інтерферону і індуктора його ендогенного синтезу аміксин.

Специфічна профілактика гепатиту А

Раніше широко застосовувалася серопрофілактика гепатиту А за допомогою гаммаглобулина себе не виправдала, тому основний упор був зроблений на проведення вакцинопрофілактики, проводиться щеплення від гепатиту А. З цією метою розробляються і вже використовуються різні варіанти вакцин. У Росії ефективна вакцина проти гепатиту А була отримана ще в 1995 р, і зараз вона успішно застосовується.