Вірус гепатиту А

Вірусний гепатит А – інфекційне захворювання людини, що характеризується переважно ураженням печінки та клінічно проявляється інтоксикацією та жовтяницею. Вірус гепатиту А був відкритий у 1973 році С. Файнстоуном (та ін.) за допомогою методу імунної електронної мікроскопії та шляхом зараження мавп – шимпанзе та ігрунок. Суть методу імунної електронної мікроскопії полягає в тому, що до фільтрату калу хворого на гепатит А додають специфічні антитіла (сироватку реконвалесцентів), а осад піддають електронній мікроскопії. Завдяки взаємодії вірусів зі специфічними антитілами вони зазнають специфічної агрегації. У цьому випадку їх легше виявити, а агрегація під впливом антитіл підтверджує специфічність збудника. Відкриття С. Файнстоуна було підтверджено в експериментах на добровольцях.

Вірус гепатиту А має сферичну форму, діаметр віріона становить 27 нм. Геном представлений одноланцюговою позитивною РНК з мм 2,6 MD. Суперкапсиду немає. Тип симетрії кубічний - ікосаедр. Капсид має 32 капсомери, він утворений чотирма поліпептидами (VP1-VP4). За своїми властивостями вірус гепатиту А належить до роду Heparnovirus, родини Picornaviridae. За антигенами вірус гепатиту А (HAV - hepatitis A virus) є однорідним. HAV добре розмножується в організмі шимпанзе, бабуїнів, гамадрілів та мавп-ігрунок. Тривалий час вірус не вдавалося культивувати. Лише в 1980-х роках вдалося отримати культури клітин, в яких розмножується HAV. Спочатку для цих цілей використовували безперервні клітинні лінії нирок ембріонів макаки-резусу (культура FRhK-4), а зараз використовується безперервна клітинна лінія клітин нирок зеленої мавпи (культура 4647).

Згідно з рекомендаціями експертів ВООЗ прийнято таку номенклатуру маркерів вірусу гепатиту А: вірус гепатиту А – антитіла до вірусу гепатиту А проти ВГА: анти-ВГА IgM та анти-ВГА IgG.

ВГА – це невелика частинка діаметром 27-30 нм, що має ікосаедричну симетрію та володіє однорідністю. Електронограма, отримана методом імунної агрегації, виявляє електронно-щільні частинки з поверхнево розташованими симетрично розташованими капсомерами. При негативному контрастуванні в препаратах виявляються як повні, так і порожні частинки. Нуклеокапсид ВГА, на відміну від грипозного, не має поверхневих виступів та мембрани. Важливо також, що віріон ВГА не має серцеподібної структури.

На основі своїх фізико-хімічних властивостей вірус гепатиту А класифікується як такий, що належить до родини пікоравірусів, роду ентеровірусів з порядковим номером 72. Однак ця таксономія виявилася занадто незвичайною, і ВООЗ вважала за можливе зберегти термінологію «вірус гепатиту А».

Як і всі віруси родини Picornaviridae, вірус гепатиту А містить рибонуклеїнову кислоту. Деякі лабораторії продемонстрували можливість клонування геному вірусу гепатиту А, що відкриває перспективу отримання вакцин.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Резистентність до вірусу гепатиту А

Вірус відносно стійкий до високих температур, кислот, жирових розчинників (не містить ліпідів), дезінфікуючих засобів, а також добре переносить низькі температури. Все це сприяє його тривалому збереженню в зовнішньому середовищі. За кімнатної температури він виживає протягом кількох тижнів, при 60 °C частково втрачає свою інфекційність через 4-12 годин, а повністю – через кілька хвилин при 85 °C. Він має високу стійкість до хлору, завдяки чому здатний проникати у водопровідну воду через бар'єри водоочисних споруд.

Підсумовуючи всі дані, можна охарактеризувати вірус гепатиту А наступним чином:

• природним господарем є людина;
• піддослідні тварини - ігрунки, шимпанзе;
• джерелом інфекції є фекалії;
• хвороба має епідемічний та ендемічний характер;
• шлях передачі: фекально-оральний;
• інкубаційний період – 14-40 днів;
• переходу в хронічний гепатит – не спостерігається.

Імунологічні властивості ВГА такі:

• Прототипні штами - Ms-1, CR-326, GВG. Всі імунологічно подібні або ідентичні;
• Антитіла – IgM та IgG, виробляються у відповідь на введення структурних білків вірусу та є захисними;
• I. Захисний ефект гамма-глобуліну сироватки крові людини – запобігає або послаблює захворювання, якщо його ввести до зараження або протягом інкубаційного періоду.

Фізико-хімічні характеристики НАУ такі:

• Морфологія: безоболоночна сферична частинка з кубічною симетрією, капсид складається з 32 капсомерів;
• Діаметр - 27-30 нм;
• Густина в CsCl (г/см3) - 1,38-1,46 (відкриті частинки), 1,33-1,34 (зрілий віріон), 1,29-1,31 (незрілі віріони, порожні частинки);
• Коефіцієнт седиментації – 156-160 зрілих віріонів;
• Нуклеїнова кислота — це одноланцюгова лінійна РНК;
• Відносна молекулярна маса - 2,25·106-2,8·106 кД;
• Кількість нуклеотидів становить 6500-8100.

Стабільність ВГА до фізичних та хімічних впливів така:

• Хлороформ, ефір - стабільні;
• Хлор, 0,5-1,5 мг/л, 5 °C, 15 хв - часткова інактивація;
• Хлорамін, 1 г/л, 20 °C, 15 хв - повна інактивація;
• Формалін, 1:4000, 35-37 °C, 72 год - повна інактивація, 1:350, 20 °C, 60 хв - часткова інактивація.

Температура:

• 20-70 °C - стабільний;
• 56 °C, 30 хв - стабільний;
• 60 °C, 12 год - часткова інактивація;
• 85 °C, 1 хв - повна інактивація;
• Автоклавування, 120 °C. 20 хв - повна інактивація;
• Сухий жар, 180 °C, 1 година - повна інактивація;
• НЛО, 1,1 Вт, 1 хв – повна інактивація.

Наведені дані показують, що за своїми фізико-хімічними властивостями вірус гепатиту А найближчий до ентеровірусів. Як і інші ентеровіруси, ВГА стійкий до багатьох дезінфікуючих розчинів та повністю інактивується протягом кількох хвилин при 85 °C та автоклавуванні.

Доведено, що вірус гепатиту А може розмножуватися в первинних та безперервних моношарових лініях культур клітин людини та мавпи. Особливо активне розмноження вірусу гепатиту А в культурах in vitro спостерігається при використанні екстрактів печінки хворих мавп як вихідного матеріалу. Слід, однак, зазначити, що в усіх експериментах з розмноження вірусу гепатиту А на культурах in vitro звертається увага на тривалий інкубаційний період під час первинних пасажувань (до 4-10 тижнів), згодом накопичення вірусного генетичного матеріалу збільшується, але абсолютні значення залишаються дуже незначними, що дає підстави багатьом дослідникам говорити про неповну реплікацію вірусу гепатиту А в культурах тканин.

Узагальнюючи літературні дані щодо репродукції вірусу гепатиту А в позатканинних культурах, можна сказати, що факт тривалого виживання ВГА in vitro не підлягає сумніву. Оптимальні умови для стабільно високого рівня реплікації вірусу остаточно не визначені, і це перешкоджає вивченню його біологічних властивостей, отриманню джерела реагентів для виробництва діагностичних засобів та розробці вакцин.

Водночас у літературі можна знайти більш оптимістичні судження щодо цієї проблеми. Вирішення всіх питань, пов'язаних з культивуванням вірусу гепатиту А, є справою найближчого майбутнього. При вивченні оптимальних умов для розмноження ВГА в культурі ембріональних клітин нирок макаки-резуса було виділено дві фази: фазу продукування інфекційного вірусу (до 6-8 днів на рівні 5-го пасажу) та фазу інтенсивного накопичення вірусного антигену. Також було показано, що найбільш значне накопичення вірусного антигену відбувається за умов так званого роликового культивування (обертові колби). Цей метод відкриває широкі можливості для отримання культурального антигену у великих кількостях, а отже, з'явиться вихідний матеріал для приготування діагностичних систем та виготовлення вакцин.

Епідеміологія гепатиту А

Вірус гепатиту А є високопатогенним для людини. За даними ВООЗ (1987), для виникнення захворювання достатньо інфікування лише одним віріоном. Однак практична інфекційна доза, ймовірно, значно вища. Єдиним джерелом інфекції є інфікована людина. Вірус виділяється у великій кількості з калом за 12-14 днів до початку жовтяниці та протягом 3 тижнів жовтяничного періоду. Істотних відмінностей у виділенні збудника у пацієнтів з жовтяничною, безжовтяничною та безсимптомною формами гепатиту А не виявлено. Шлях зараження – фекально-оральний, переважно водний, а також побутовий та харчовий. Шлях зараження – фекально-оральний, переважно водний, а також побутовий та харчовий. Основний (первинний) шлях передачі вірусу – водний. Також можливе зараження повітряно-крапельним шляхом. Сприйнятливість населення універсальна. Уражаються переважно діти віком до 14 років. Захворювання має виражену осінньо-зимову сезонність.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Симптоми гепатиту А

Інкубаційний період коливається від 15 до 50 днів, залежно від інфікуючої дози вірусу, але в середньому становить 28-30 днів. Потрапляючи в організм, вірус гепатиту А розмножується в регіонарних лімфатичних вузлах, проникає в кров, а потім у клітини печінки та викликає гострий дифузний гепатит, який супроводжується пошкодженням гепатоцитів та ретикулоендотеліальних елементів печінки та зниженням її детоксикаційної та бар'єрної функцій. Пошкодження гепатоцитів відбувається не внаслідок прямої дії вірусу, а в результаті імунопатологічних механізмів. Найбільш типовою картиною гепатиту А є гостра жовтянична циклічна форма: інкубаційний період, продромальний (переджовтяничний), жовтяничний період та реконвалесценція. Однак у вогнищах інфекції виявляється велика кількість пацієнтів з безжовтяничними та безсимптомними формами інфекції, кількість яких значно переважає над жовтяничними («феномен айсберга»).

Постінфекційний імунітет є сильним і тривалим, що викликається віруснейтралізуючими антитілами та клітинами імунної пам'яті.

Мікробіологічна діагностика гепатиту А

Діагностика гепатиту А (за винятком інфекції тварин – шимпанзе, ігрунок, бабуїнів, яких у нас немає) базується на різних імунологічних методах: РСК, метод імунофлуоресценції, гемаглютинація імунної адгезії (комплекс вірусний антиген + антитіло у присутності комплементу адсорбується на еритроцитах і викликає їх склеювання). Однак можливості використання цих методів обмежені через відсутність специфічних вірусних антигенів, а реакція імунофлуоресценції вимагає біопсії печінки, що небажано. Метод імунної електронної мікроскопії є надійним і специфічним, але він дуже трудомісткий. Тому поки що єдиною прийнятною імунологічною реакцією є метод імуносорбентного аналізу твердої фази у вигляді ІФМ або РІМ, особливо в модифікації «захоплення» імуноглобулінів класу М. У нашій країні для цієї мети запропоновано тест-систему – «DIAGN-A-HEP». Принцип дії цієї тест-системи полягає в наступному. Спочатку на стінках полістирольних лунок сорбуються антитіла до імуноглобулінів класу М (антиімуноглобуліни М), потім додається сироватка крові пацієнта, яку потрібно досліджувати. Якщо вона містить антитіла IgM, вони зв'яжуться з антитілами класу М, потім додається специфічний вірусний антиген (вірус гепатиту А), який отримують шляхом вирощування в культурі клітин. Систему промивають, і до неї додають противірусні антитіла, мічені пероксидазою хрону. Якщо всі чотири компоненти системи взаємодіють, утворюється чотиришаровий «сендвіч»:

• антиімуноглобуліни М,
• імуноглобуліни М (проти вірусу гепатиту А - у сироватці крові досліджуваного пацієнта),
• вірусний антиген,
• мічені ферментами противірусні антитіла.

Для виявлення цього комплексу в лунки додають субстрат для ферменту. Під впливом ферменту він руйнується, і утворюється забарвлений продукт. Інтенсивність забарвлення можна виміряти кількісно за допомогою спектрофотометра або фотоколориметра.

Перевагою методу «захоплення» IgM є те, що антитіла цього класу імуноглобулінів з'являються під час первинної імунної відповіді та свідчать про активну стадію інфекції, зникаючи після перенесеного захворювання. Противірусні антитіла, що належать до класу IgG, навпаки, зберігаються протягом тривалого часу після перенесеного захворювання, забезпечуючи набутий імунітет. Для виявлення вірусу гепатиту А запропоновано метод ДНК-зонду: як зонд використовується комплементарна ДНК vRNA.

Лікування гепатиту А

З огляду на те, що при вірусному гепатиті порушується вироблення інтерферону, лікування гепатиту А базується на застосуванні інтерферону та індуктора його ендогенного синтезу – аміксину.

Специфічна профілактика гепатиту А

Раніше широко застосовувана серопрофілактика гепатиту А гамма-глобуліном себе не виправдала, тому основний акцент робився на проведенні вакцинопрофілактики, проводиться вакцинація проти гепатиту А. Для цього розробляються та вже використовуються різні види вакцин. У Росії ефективна вакцина проти гепатиту А була отримана ще в 1995 році, і зараз вона успішно використовується.