13с уреазний тест: підготовка, результати, позитивний, негативний

З часу виявлення асоційованої з хронічним гастритом і виразками шлунка і дванадцятипалої кишки бактерії Helicobacter pylori були розроблені методи її діагностики, в тому числі уреазний тест, який дозволяє виявити дані мікроорганізми у конкретного пацієнта, підтвердити їх причетність до розвитку гастроентерологічних захворювань і призначити ефективне лікування.

Фермент уреаза як біомаркерів хелікобактерної інфекції

Бактерії H. Pylori захищаються від кислого середовища в просвіті шлунка двома способами. По-перше, пошкоджуючи слизову оболонку своїми джгутиками, мікроорганізми добираються в її нижні шари, аж до епітеліальних клітин, де рН вище (тобто кислотність нижче). По-друге, бактерії нейтралізує кислоту, синтезуючи в великих кількостях каталитически активний високомолекулярний металлоферментов уреазу або сечовини амідогідролазу.

Використання уреази при діагностиці  бактерією  можливо внаслідок не тільки цитоплазматичної активності даного ферменту, а й зовнішньої взаємодії з клітинами-господарями.

Під дією уреази відбувається розщеплення сечовини шлунка до нітриду водню (аміаку) і двоокису вуглецю (вуглекислого газу). Вони реагують з соляною кислотою шлункового соку і забезпечують навколо H. Pylori зону з нейтральною кислотністю, а також підтримують метаболізм бактеріальних клітин.

Ось чому уреаза є найважливішим фактором колонізації H. Pylori слизової оболонки шлунка людини, а виявлення уреолітіческой активності вважається биомаркером вірулентності даної бактерії, який гастроентерологи - проводячи уреазний тест - використовують для діагностики хелікобактерної інфекції, а також для контролю результатів медикаментозного знищення (ерадикації) бактерій.

Діагностика H. Pylori включає інвазивні і неінвазивні тести - в залежності від того, чи потрібно ендоскопічне обстеження шлунка (фіброгастродуоденоскопія) чи ні. Інвазивним тестом є швидкий уреазний тест або експрес-тест на уреазу (RUT-test), який вимагає отримання зразків тканин (біопсії). 13С уреазний дихальний тест (13C-UBT) - найбільш поширений серед неінвазивних тестів.

Слід зазначити, що неінвазивну діагностику H.pylori можна провести за допомогою аналізу крові на антитіла (специфічність на рівні 75%, чутливість - 84%), аналізу сечі ELISA (з чутливістю 96% і специфічністю 79%), копрограми на антигени бактерії. Більше інформації -  Інфекція Helicobacter pylori: антитіла до Helicobacter pylori в крові

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7]

Показання уреазний тест

Сама по собі колонізація слизової шлунка H. Pylori не є захворюванням, це фактор підвищеної бактеріальної навантаження на організм, яка за певних умов може стати поштовхом розвитку ряду патологій шлунка і верхнього відділу шлунково-кишкового тракту.

Показання до проведення діагностики хелікобактерної інфекції, зокрема, уреазний тест, пов'язані з гастритом з підвищеною кислотністю, антральним і атрофічним гастритами, дуоденітом, виразкову хворобу шлунка і дванадцятипалої кишки, шлункової MALT-лімфомою. Після ендоскопічної резекції раку шлунка ранній стадії може проводитися гістологічне дослідження в поєднанні з швидким уреазний тестом - ФГДС з уреазний тестом.

Гастроентерологи можуть призначати уреазний тест при скаргах пацієнтів на відчуття тяжкості і дискомфорту в епігастральній ділянці, на часті печії після прийому їжі, на відрижку кислим або тухлим, на гіркота в роті, нудоту, кишкові розлади, ниючі або переймоподібні болі в шлунку.

[8], [9]

Підготовка

Підготовка до 13С уреазной дихального тесту полягає в тому, що пацієнт повинен припинити: прийом антибіотиків за 4 тижні до тестування, а НПЗЗ, препарати групи інгібіторів протонного насоса (знижують кислотність шлунка) і застосовуються при печії антациди або адсорбенти - мінімум за два тижні. Прийом будь-яких медпрепаратів слід припинити за п'ять-шість днів, а вживання спиртовмісних напоїв і куріння - за три доби до тесту.

Також приблизно за тиждень до тестування рекомендується не вживати в їжу бобові культури, оскільки в квасолі, горосі, сочевиці, сої та бобах є уреаза (яка захищає рослини від хвороб і комах-шкідників).

Увечері напередодні тесту протипоказаний пізній щільна вечеря; в день тестування потрібно провести звичайну гігієну порожнини рота, а за годину-півтора перед аналізом не слід нічого пити або використовувати жуйку.

[10], [11], [12], [13], [14]

Техніка уреазний тест

Техніка проведення:

• спочатку береться зразок базового дихання - робиться видих в м'яку пластикову ємність (і герметично закривається);
• приймається всередину рідину з додаванням 13C-сечовини;
• через 25-30 хвилин береться другий зразок повітря, що видихається - в інший контейнер.

Отримані таким чином зразки аналізуються на мас-спектрометрі з поділом ізотопів у другому зразку і визначенням їх концентрації. Різниця між значеннями в другому і першому зразку виражається як дельта (δ) в порівнянні з базовим рівнем. Нормальні показники, тобто негативні значення міченого атома 13С у неінфікованих пацієнтів варіюються 0,15-0,46%, а позитивні значення при наявності інфекції становлять 1,2-9,5% зі швидкістю гідролізу сечовини більше 12-14 мкг / хв.

А якщо простіше: виявлення міченого ізотопом 13С вуглекислого газу в повітрі, що видихається вказує на те, що сечовина піддалася гідролізу уреазний ферментом H. Pylori, що, власне, і підтверджує факт її присутності в шлунку.

Дихальний тест на H. Pylori

Тест 13C-UBT або 13С уреазний дихальний тест на хелікобактер пілорі є одним з найбільш важливих неінвазивних методів виявлення даної інфекції: при 100% -й чутливості і специфічності 98% ризик хибнопозитивних і помилково негативні результати в порівнянні з гістологією і аналізом крові на антитіла нижче на 2 , 3%.

В основі аналізу лежить гідроліз уреазой H. Pylori перорально введеної рідкої сечовини, міченої атомом (стабільним нерадіоактивним ізотопом) вуглецю 13C (50-75 мг 13C-сечовини, розведеної 100 мл рідини).

Сечовина, маркована ізотопним індикатором, в шлунку піддається гідролізу з виділенням аміаку і містить мічені атоми двоокису вуглецю, яка дифундує в кров і при диханні виводиться з легких. Мічений вуглекислий газ фіксує апарат для проведення аналізу - мас-спектрометр, вражаючі дії яких засновані на недісперсіонной ізотопселектівной спектроскопії, або інфрачервоний спектроскопічний аналізатор.

Швидкий уреазний тест

Швидкий уреазний тест (Rapid Urease Test або RUT) проводиться в ході ендоскопічного обстеження шлунка і дванадцятипалої кишки - з використанням сучасних ендофіброскоп - і одночасного взяття біопсійного зразків. Біоматеріал належить брати з антральному частини шлунка. Так що фіброгастродуоденоскопія або ФГДС з уреазний тестом є інвазивним діагностичним методом.

Отриманий біоптат повністю занурюють в готову стандартизовану середу, що містить агаровий гель, сечовину, кислотно-лужний індикатор фенолсульфофталеін і бактериостатик (додається для запобігання зростанню забруднюючих мікроорганізмів і хибнопозитивних результатів).

Якщо в зразку тканини шлунка присутні бактерії H. Pylori, що продукуються ними уреаза буде гідролізувати сечовину і підвищить pH, що чітко видно по зміні жовтого кольору індикатора на помаранчевий (при рН 6,8) і пурпурний (при рН> 8) 75% позитивних тестів змінюють колір за 120-180 хвилин, і чим швидше індикатор змінює колір, тим чисельність бактерій більше. Але тести, які здаються негативними, витримують протягом 24 годин.

Швидкий уреазний тест позитивний, що це таке? Позитивний тест RUT - почервоніння індикатора - означає, що в вміщеному в агарове середовище зразку біопсії знаходиться мінімум 105 бактерій H. Pylori, хоча зазвичай їх концентрація вище.

Чутливість різних модифікацій тестів варіюється в діапазоні 90-98%, а специфічність - 97-99%.

Як відзначають гастроентерологи, якщо у пацієнта в вироку вказано різко позитивний уреазний тест (поставлені три хрестика), то це означає: рН> 8, і індикатор змінив колір менш ніж за 60 хвилин з моменту занурення биоптата, що свідчить про велику кількість H.pylori і високому рівні експресії уреази. Приблизне число бактерій може бути підраховано під час гістологічного дослідження біоптату під мікроскопом, і якщо на візуалізіруемого ділянці воно перевищує 40-50, рівень зараження вважається високим.

13С уреазний дихальний тест рідко дає хибнопозитивні результати, і у пацієнтів з підозрою на виразкову хворобу шлунка або дванадцятипалої кишки один позитивний тест вважається підтвердженням діагнозу, тоді як негативний результат має бути підтверджений результатами ФГДС з уреазний тестом.